発がんにおけるTGF-βの役割に関する遺伝子改変マウスを用いた研究

使用转基因小鼠研究 TGF-β 在致癌作用中的作用

基本信息

批准号：
16021206
负责人：
加藤光保
金额：
$ 3.33万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16021206/
关键词：
トランスジェニックマウス TGF-β ephrin 角化細胞重層化 Jun ELAC2 PMEPA1

项目摘要

消化管上皮と尿路上皮で特異的に導入遺伝子が発現されるFabp4xプロモーターを用いて、優勢抑制型TGF-βII型受容体とephrin-A1のトランスジェニックマウスを、それぞれ2ラインと3ライン樹立した。各臓器でトランスジーンの発現を確認し、消化管上皮特異的にトランスジーンが発現していることを確認した。このトランスジェニックマウスの消化管上皮の組織像等の継時変化を観察するとともに、Minマウスとの交配実験を行っている。TGF-βシグナルの標的遺伝子のうち、転写活性化能を失わせたJunBΔNまたはc-JunΔNを発現させると、ヒト角化細胞株HaCaTは3次元培養を行っても重層化が誘導されないことを見いだした。これらの変異Junを発現させたHaCaTは、AP-1活性が抑制されていたが増殖能は低下しておらず、AP-1活性の低下が何らかの未知の機能によって重層化を抑制していることが示唆された。また、JNKインヒビターも重層化を抑制することから、表面を空気に暴露する3次元培養法による角化細胞の重層構造の形成には、JNKによるJunの活性化を介して誘導されることが示唆された。さらに、TGF-βの増殖抑制シグナルに関わる分子として、新たにELAC2を同定した。ELAC2はN末端領域でSmadと結合し、TGF-βシグナルによる標的遺伝子の転写活性化を増強する作用を有していることが判明した。また、PMEPA1がTGF-βシグナルのネガティブフィードバック機構に関与することを発見した。

使用FABP4X启动子分别以两条和三条线建立了具有显性抑制性TGF-βII型受体和Ephrin-A1的转基因小鼠，其中转基因在胃肠道和尿皮细胞中专门表达。在每个器官中证实了转基因的表达，并证实了转基因在胃肠道上皮中特别表达。转基因小鼠会观察到胃肠道上皮的组织学形象的变化，并用Min小鼠进行交配实验。我们发现，当JunbΔn或c-JunΔn失去了其在TGF-β信号中激活目标基因之间转录的能力时，即使在执行3D培养物的情况下，人类角化细胞系HACAT也不会诱导分层。表达这些突变体JUN的HACAT抑制了AP-1活性，但没有降低增殖能力，这表明AP-1活性的降低通过某些未知功能抑制了分层。此外，JNK抑制剂还抑制分层，这表明通过3D培养方法形成角质性细胞的分层结构，其中通过JNK激活JUN来诱导表面暴露于空气。此外，ELAC2新近鉴定为参与TGF-β生长抑制信号的分子。发现ELAC2在N末端区域与SMAD结合，并具有通过TGF-β信号增强靶基因转录激活的作用。我们还发现，PMEPA1参与TGF-β信号的负反馈机制。