权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

GTP結合蛋白質H-Rasによる海馬長期増強の制御の研究

GTP结合蛋白H-Ras对海马长时程增强的调控研究

基本信息

批准号：
10155205
负责人：
饗場篤
金额：
$ 0.96万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

H-RasによるNMDA受容体応答の制御について検討した。1) NMDA受容体の発現量海馬で発現しているNMDA受容体サブユニット、GluR ζ 1(NR1)、GluR ε 1(NR2A)、GluR ε 2(NR2B)の発現量を検討した。海馬粗抽出液をSDS-PAGEにより分離し、各サブユニットを特異的に認識する抗体を用いたウエスタンブロットにより定量した結果、野性型とノックアウトマウスでは差はなかった。また、NMDA受容体ラジオリガンド、[propyl-2,3-3H]-CGP 39653を用いたリガンド結合実験でも海馬細胞膜上に存在するNMDA受容体密度は野性型とノックアウトマウスでは有意な差は無かった。2) NMDA受容体のリン酸化NMDA受容体の活性はε1、ε2がチロシンリン酸化にされることによって制御されることが報告されている。そこで、海馬粗抽出液を0.5%SDS存在下で煮沸し、NMDA受容体を各サブユニットに解離させた後、εl、ε2を特異的に認識する抗体を加え免疫沈降物を得た。さらに、共沈産物をSDS-PAGEにより分離し、リン酸化チロシン残基を特異的に認識する抗体を用いたウエスタンブロットによりε1、ε2両サブユニット共、リン酸化量が増加していることが明らかとなった。3) NMDA受容体中のサブユニット量の変化NMDA受容体の活性は構成するサブユニットの変化によっても起りえる。そこで、海馬粗抽出液を煮沸せず、抗ζ1抗体と共沈する蛋白質量をウエスタンブロットにより定量した。その結果、ε1、ε2の蛋白量がノックアウトマウスで変化していないこと、PSD95蛋白質の量も変化していないことが明らかとなった。以上の結果より、H-rasノックアウトマウスでのNMDA受容体応答の特異的な活性化はε1、ε2サブユニットのチロシン残基のリン酸化の増加によって生じている可能性が示唆された。

H-Ras's NMDA receptor response is controlled by the NMDA receptor. 1) NMDA receptor receptor, GluR ζ 1 (NR1), GluR ε 1 (NR2A), GluR ε 2(NR2B)の発现quantityを検検した. Crude hippocampal extracts are used for SDS-PAGE separation and identification of antibodies specific to each drug.いたウエスタンブロットによりquantitative した results, wild type とノックアウトマウスでは difference はなかった.また, NMDA acceptor ラジオガンド, [propyl-2,3-3H]-CGP 39653を Used to combine with いたリガンド and it exists on the hippocampal cell membrane するNM The density of DA receptors is the same as that of the wild type. 2) NMDA receptor activity ε1, ε2 acidification NMDA receptor activity The acidification of シンリンにされることによってcontrolled されることがreport されている.そこで, seahorse crude extract をboiled in the presence of 0.5% SDS, NMDA receptor をeach サブユAfter the dissociation of ニットにさせた, εl and ε2をspecific にrecognition antibodies were added and the immunoprecipitates were obtained.さらに、SDS-PAGE separation of co-precipitated products, リン acidified チロシン residues をspecific recognition and use of antibodiesウエスタンブロットによりε1, ε2両サブユニットTotal, the acidification amount of リン is increased by the addition of していることが明らかとなった. 3) The amount of activity in the NMDA receptor is determined by the activity of the NMDA receptor.そこで, seahorse crude extract was boiled, anti-ζ1 antibody was co-precipitated, and protein quality was quantified.その results, ε1, ε2 のprotein amount がノックアウトマウスで変化していないこと, the amount of PSD95 protein has changed. The above results show that H-ras ノックアウトマウスでのNMDA receptor response is specific for activation 1. The possibility of ε2 サブユニットのチロシン residue のリン acidification plus によって生じている shows the possibility of のリン acidification.