コンディショナルRacl欠損マウスを用いた発がんの研究

使用条件 Racl 缺陷小鼠进行致癌研究

• 批准号: 13214027
• 负责人: 饗場 篤
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13214027/
• 关键词: トランスジェニックマウス; ノックアウトマウス; Rac1; Cre; リコンビナーゼ; BAC; EGFP,転移; ES細胞

本研究では、Racの発がんおよび転移浸潤における機能をin vivoで明らかにするため、Rac1をコンディショナルにノックアウトするマウスを作成する。方法としては、rac1ノックアウトマウスをrac1染色体DNAのBACトランスジジーン(flox-rac1-EGFP Tg)でレスキューする。このマウスをRac1ヘテロ型マウス(rac1+/-)マウスと連続して交配することによって、(rac1-/-)/flox-rac1-EGFPTgマウスを作成する。このマウスにCreを作用させた細胞ではRac1が欠損すると同時にEGFPが発現する。本年度はフィーダーを必要としない胚性幹(ES)細胞にrac1ターゲッティングベクターを導入し、rac1(+/-)マウスを作成することに成功した。この系では、従来必要とされるフィーダー細胞の培養を必要とせず、ノックアウト細胞作成のための作業の簡略化ができる。さらに、Rac1BACクローンをマウス129BACライブラリーより単離し、制限酵素地図をパルスフィールド電気泳動、サザンハイブリダイゼーションにより決定した。rac1遺伝子の開始コドンの5'上流のノンコーディングエキソンにloxPを挿入したDNAをシャトルベクターに挿入し、それをBACを持つ大腸菌に導入することで、大腸菌内で、BACDNAとシャトルベクター中のDNAの間で相同組換えを生じさせ、BAC上にloxP配列を導入した。さらに、同様の方法を用いてloxP-EGFPをrac1遺伝子のpolyA付加シグナルの下流に導入し、目的のTgコンストラクト(flox-rac1-EGFP)を作成した。さらに、約100kbのflox-rac1-EGFP-DNA断片をBACベクターから分離精製し、B6受精卵にインジェクトした。現在までにflox-racl-EGFPTgを独立に4系統得た。

In this study, the function of Rac and Rac in vivo was established. Method: RAC1-EGFP Tg (flox-rac1-EGFP Tg) Rac1-EGFPTg is the most important component of this process. The cells were damaged by the presence of EGFP. This year, we have successfully introduced rac1 (+/-) into embryonic stem (ES) cells This is a necessary way to simplify the operation of cell culture and cell production. Rac1BAC is the most important factor in determining the activity of enzymes. The 5'upstream of the rac1 gene is introduced into Escherichia coli, BAC DNA is introduced into Escherichia coli, BAC DNA is introduced into BAC, and loxP is introduced into BAC. In addition, the same method was used to construct the Tg template (flox-rac1-EGFP) for the downstream introduction of loxP-rac1-EGFP. The flox-rac1-EGFP-DNA fragment of about 100kb was isolated and purified from B6 zygotes. Now flox-racl-EGFPTg is independent of 4 systems.

项目成果

Tabata et al.: "Control of metabotropic glutamate receptor's dynamic range by extracellular calcium"Mol.Cell.Neurosci.. (印刷中). (2002)

Tabata 等人：“细胞外钙对代谢型谷氨酸受体动态范围的控制”Mol.Cell.Neurosci..（出版中）。

Hashimoto et al.: "Roles of glutamate receptor δ2 subunit(GIuR δ2) and metabotropic glutamate receptor subtype 1 (mGluR1) in climbing fiber synapse elimination during postnatal cerebellar development"J. Neurosci.. 21. 9701-9712 (2001)

Hashimoto等人：“谷氨酸受体δ2亚基（GIuR δ2）和代谢型谷氨酸受体亚型1（mGluR1）在出生后小脑发育过程中攀爬纤维突触消除中的作用”J. Neurosci.. 21. 9701-9712​​（2001）

Shutoh et al.: "Loss of adaptability of horizontal optokinetic response eye movements in mGluR1 knockout mice"Neurosci.Res.. 42. 141-145 (2002)

Shutoh 等人：“mGluR1 敲除小鼠中水平视动反应眼球运动的适应性丧失”Neurosci.Res.. 42. 141-145 (2002)

Maejima et al.: "Presynaptic inhibition caused by retrograde signal from metabotropic glutamate to cannabinoid receptors"Neuron. 31. 463-475 (2001)

Maejima 等人：“从代谢型谷氨酸到大麻素受体的逆行信号引起的突触前抑制”神经元。