T4ファージ分子シャペロンgp57Aの折りたたみと四量体形成

T4噬菌体分子伴侣gp57A的折叠和四聚体形成

• 批准号: 10157205
• 负责人: 有坂 文雄
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10157205/
• 关键词: 分子シャペロン; 繊維状蛋白質; four helix-bundle; 示差走査型微少熱量計; 熱変性; グアニジン塩酸変性; co-シャペロン

T4ファージの尾繊維及び小尾繊維の形成に必須でファージにコードされている分子シャペロンgp57A(gp=gene product、57Aは遺伝子名)につき、これまでに以下のことが明らかになった。本タンパク質は円2色性(CD)スペクトルによれば約94%がαヘリックスからなり、沈降平衡法に基づく超遠心分析の結果、4量体を形成していることが明らかとなった。超遠心分析の結果と配列解析から本蛋白質は4ヘリックスバンドルを形成する細長い分子と考えられる。gp57Aは熱変性やグアニジン塩酸などの変性剤による変性がきわめて可逆的であり、示差走査型微少熱量測定(DSC)および円2色性(CD)により、1つの中間体を経る三状態転移が観測された。現在の問題点はgp57Aがターゲット蛋白質gp12とは直接相互作用しないことがほぼ明らかになったことである。本蛋白質を共発現しないとgp12が活性を持たないことから、本蛋白質がgp12の折りたたみに必須であることは明らかである。おそらく、gp57Aはいわゆるco-シャペロンを必要とすると考えられる。一昨年報告された大腸菌GrpEはやはり4ヘリックスバンドルを持ちgp57A類似した構造を持つように思われるので、gp57AにもGrpEのDnaKに対応するco-シャペロンの存在が予想される。そこで、Far-Westernプロット法によりco-シャペロンの検索を行ったが、明快な答えを得ることができなかった。現在、以下のアプローチによってco-シャペロンの検索を行っている。即ち、大腸菌に変異を持ち、57Aアンバー株の増殖可能な変異株が報告されているので、これを新たに作成し、この変異株の変異部位をマッピングすることによってgp57Aのco-シャペロンを検索する計画を進めている。

T4 フ ァ ー ジ の tail 繊 dimension and small tail 繊 び d の form に must で フ ァ ー ジ に コ ー ド さ れ て い る molecular シ ャ ペ ロ ン gp57A (gp = gene product, 57, a は heritage 伝 child name) に つ き, こ れ ま で に following の こ と が Ming ら か に な っ た. This タ ン パ ク qualitative は has drifted back towards &yen; 2 (CD) color ス ペ ク ト ル に よ れ ば about 94% が alpha ヘ リ ッ ク ス か ら な り, sink balance method に づ く buzzer-beaters を の heart analysis results, 4 quantity body formation し て い る こ と が Ming ら か と な っ た. と の heart analysis results with vast column analysis か ら this protein は 4 ヘ リ ッ ク ス バ ン ド ル を form す る slender い molecular と exam え ら れ る. Gp57A は hot - sex や グ ア ニ ジ ン acid salt な ど の - sexual tonic に よ る - sex が き わ め て reversible で あ り, less differential a walkthrough type micro calorimetry (DSC) お よ び has drifted back towards &yen; 2 (CD) color に よ り, 1 つ の intermediates を 経 る three state planning move が 観 measuring さ れ た. Now の problem は gp57A が タ ー ゲ ッ ト protein gp12 と は direct interaction し な い こ と が ほ ぼ Ming ら か に な っ た こ と で あ る. This protein を 発 now し な い と gp12 が active を hold た な い こ と か ら, this protein が gp12 の fold り た た み に must で あ る こ と は Ming ら か で あ る. Youdaoplaceholder0, gp57A わゆる わゆるco-シャペロ を を it is necessary to とすると take the えられる test. YiZuo years report さ れ た coliform GrpE は や は り 4 ヘ リ ッ ク ス バ ン ド ル を hold ち gp57A similar し た tectonic を hold つ よ う に think わ れ る の で, gp57A に も GrpE の DnaK に 応 seaborne す る co - シ ャ ペ ロ ン の exist が to think さ れ る. そ こ で, Far - Western プ ロ ッ ト method に よ り co - シ ャ ペ ロ ン の 検 cable line を っ た が, lively な answer え を must る こ と が で き な か っ た. Now, the following アプロ アプロ チによって チによってco-シャペロ <e:1> 検 検 ask を lines って る る る. ち, coliform に - different を hold ち, 57 a ア ン バ ー strains may な の raised colonization - different strains が report さ れ て い る の で, こ れ を new た に し, consummate こ の - different strains の - different parts を マ ッ ピ ン グ す る こ と に よ っ て gp57A の co - シ ャ ペ ロ ン を 検 cable す る project を into め て い る.

项目成果

Shigeki TAKEDA: "Discovery of the tail tube gene of bacteriophage Mu and sequence analysis of the sheath and tube genes"Biochim. Biophys. Acta. 1399. 88-92 (1998)

Shigeki TAKEDA：“噬菌体Mu尾管基因的发现以及鞘和管基因的序列分析”Biochim。

有坂文雄: "超遠心分析の基礎と新たな展開(1)" 蛋白質核酸酵素. 43(13). 2024-2032 (1998)

Fumio Arisaka：“超速离心分析的基础知识和新进展 (1)”蛋白质核酸酶 43(13) (1998)。

有坂文雄: "超遠心分析の基礎と新たな展開(3)" 蛋白質核酸酵素. 43(15). 2238-2244 (1998)

Fumio Arisaka：“超速离心分析的基础知识和新进展 (3)”蛋白质核酸酶 43(15) (1998)。

Shigeki TAKEDA: "Mapping of Functional Sites on the Primary Structure of the Tail Lysozyme of Bacteriophage T4 by Mutation Analysis" Biochem.Biophys.Acta. 1384. 243-252 (1998)

Shigeki TAKEDA：“通过突变分析绘制噬菌体 T4 尾部溶菌酶一级结构的功能位点”Biochem.Biophys.Acta。

有坂文雄: "生体物質相互作用のリアルタイム解析実験法" シュプリンガーフェーラーク東京社, 268 (1998)

有坂文雄：“生物材料相互作用实时分析的实验方法”Springer-Verlag Tokyo，268 (1998)