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ヒトデ卵母細胞の1-メチルアデニン情報伝達系

海星卵母细胞中的 1-甲基腺嘌呤信号系统

基本信息

批准号：
10160207
负责人：
千葉和義
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Ochanomizu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10160207/
关键词：
ヒトデ卵成熟リン酸化 Cell free PI3 ワートマニンセリンキナーゼ

项目摘要

【目的】ヒトデ卵減数分裂再開機構を解明するために、これまでに2つの実験系を確立してきた。すなわち、(1)in vitroにおける卵核胞崩壊を再現するcell free系と、(2)in vivoにおけるプロテアソーム活性の定量法、である。これらの手法を用い、in vitro、in vivo両面から、減数分裂再開の初期過程を明らかにすることを、本研究の目的とする。【経過】第一減数分裂の中期において、EGTA、グリシン、Hepesを基本組成としたpH7.0のバッファを用いたcell free系を作成したところ、第一減数分裂の終期を再現するサイクリンBの分解が観察できた。しかし分解に要する時間がin vivoに比べ長く、分解後サイクリンは再合成されなかった。一方、蛍光基質Suc-Phe-Leu-Arg-ACMSを用いて、in vivoにおけるプロテアソーム活性を求めたところ、第一減数分裂中期での受精時に活性化されることが明らかになった。【成果】減数分裂再開から徐々にプロテアソームは活性化するので、受精時における活性化をより顕著に観測できる系としてタコノマクラ卵も併用し、実験を行った。受精によって、細胞内のpHは7.2から7.5に上昇する。そこでpH7.5のバッファをマイクロインジェクションして細胞内pHの上昇を引き起こしたところ、受精なしでプロテアソームの活性は上昇した。このときEGTAを同時にマイクロインジェクションして、細胞内のカルシウム上昇を抑えても、プロテアソームの活性化は起こった。また、ヒトデ卵においても、受精後のプロテアソームの活性上昇はカルシウムに依存しないことが明らかになった。したがって、受精時には、細胞内pHの上昇が起こり、プロテアソーム活性が上昇すると考えられる。大変興味深いことに、cell free系においても、使用するバッファのpHを上昇させると、サイクリン分解が促進されることが明らかになった。このことは、プロテアソーム活性が細胞内pHに依存して制御されている可能性を示唆する。

[Objective] To clarify the mechanism of meiosis reopening and establish the mechanism of meiosis reopening. (1) Cell free system in vitro,(2) Quantitative method for oocyte breakdown activity in vivo. The purpose of this study is to investigate the early stages of meiosis. The first meiotic metaphase, EGTA, Hepes, basic components, pH7.0, and the second meiotic metaphase, the first meiotic metaphase, and the third meiotic metaphase. The time required for decomposition is longer in vivo than in vivo, and the time required for decomposition is longer than in vivo. The activity of Suc-Phe-Leu-Arg-ACMS in vivo is determined by the method of enzyme digestion. The activity of Suc-Phe-Leu-Arg-ACMS in metaphase 1 is determined by enzyme digestion. [Results] Meiosis reopening, fertilization, activation, testing, and fertilization Fertilization, intracellular pH from 7.2 to 7.5 rise. In addition, the activity of the enzyme was increased due to the increase of intracellular pH and fertilization. The EGTA is activated by the activation of the cell. The activity of the egg is increased after fertilization, and the activity of the egg is increased. During fertilization, intracellular pH increases and activity increases. Big interest, cell free system, use, pH increase, decomposition, promotion The possibility of pH dependence on the activity of these enzymes was demonstrated.