课题基金 / 基金详情

合成ペプチドと特殊抗体を活用した新規プロテアーゼ解析法

合成ペプチドと特殊抗体を活用した新規プロテアーゼ解析法
使用合成肽和特殊抗体的新型蛋白酶分析方法
批准号：
11144207
负责人：
大海 忍
金额：
$1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1999 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11144207/
关键词：
カルパインカルパスタチンカスパーゼアポトーシス切断部位抗体標的分子検索プロテアーゼ

项目摘要

项目成果

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中文摘要
翻译
ヒトT細胞JurkatのFas抗原を刺激するとアポトーシスが誘導されるが,このときカルパインの内在性阻害タンパク質カルパスタチンが断片化することを発見した.カルパスタチンの断片化は,カスパーゼの阻害剤でアポトーシスを抑えると同時に抑制された.ヒトカルパスタチン全長をコードするcDNAを大腸菌で発現させたリコンビナントタンパク質を用いて,アポトーシス細胞由来の細胞質画分がカルパスタチンを切断するか調べたところ,細胞レベルと同様な限定分解が認められた.カルパスタチンの限定分解は,非アポトーシス細胞の細胞質画分では起こらず,一連のカスパーゼ阻害剤で抑えられた.リコンビナントカルパスタチンにカスパーゼ3あるいは7を作用させると,限定分解が起こり,切断部位は233残基目のアスパラギン酸のカルボキシル末端側であることが判明した.その結果,カルパスタチンの4個のカルパイン阻害ユニットの内のアミノ末端側が限定分解によって破壊されることが分かった.限定分解によって生じるアミノ末端側の断片に対する切断部位特異抗体を作成し,アポトーシス時のカルパスタチンの細胞内動態を調べると,アミノ末端側断片は速やかに代謝されていることが示唆された.ところがこの抗体は,カルパスタチンとは異なる新たな分子を認識した.部分アミノ酸配列決定により,ひとつは熱ショックタンパク質に属するAPG-2であることが分かった.本研究では,切断部位特異抗体を用いて類似した特異性をもつカスパーゼの標的分子の検索が可能であることが示された.現在,方法論の一般化を試みている.
英文摘要
ヒトT細胞JurkatのFas抗原を刺激するとアポトーシスが誘導されるが,このときカルパインの内在性阻害タンパク質カルパスタチンが断片化することを発見した.カルパスタチンの断片化は,カスパーゼの阻害剤でアポトーシスを抑えると同時に抑制された.ヒトカルパスタチン全長をコードするcDNAを大腸菌で発現させたリコンビナントタンパク質を用いて,アポトーシス細胞由来の細胞質画分がカルパスタチンを切断するか調べたところ,細胞レベルと同様な限定分解が認められた.カルパスタチンの限定分解は,非アポトーシス細胞の細胞質画分では起こらず,一連のカスパーゼ阻害剤で抑えられた.リコンビナントカルパスタチンにカスパーゼ3あるいは7を作用させると,限定分解が起こり,切断部位は233残基目のアスパラギン酸のカルボキシル末端側であることが判明した.その結果,カルパスタチンの4個のカルパイン阻害ユニットの内のアミノ末端側が限定分解によって破壊されることが分かった.限定分解によって生じるアミノ末端側の断片に対する切断部位特異抗体を作成し,アポトーシス時のカルパスタチンの細胞内動態を調べると,アミノ末端側断片は速やかに代謝されていることが示唆された.ところがこの抗体は,カルパスタチンとは異なる新たな分子を認識した.部分アミノ酸配列決定により,ひとつは熱ショックタンパク質に属するAPG-2であることが分かった.本研究では,切断部位特異抗体を用いて類似した特異性をもつカスパーゼの標的分子の検索が可能であることが示された.現在,方法論の一般化を試みている.
期刊论文(6)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Fujikawa, H.: "Activation of protein kinases in canine basilar artery n vasospasm"J. Cerebral Blood Flow Metabol.. 19. 44-52 (1999)
Fujikawa, H.：“犬基底动脉血管痉挛中蛋白激酶的激活”J。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Shiroki, K.: "Intracellular redistribution of truncated La protein produced by polyovirus 3Cro-mediated cleavage"J. Virol.. 73. 2193-2200 (1999)
Shiroki, K.：“多病毒 3Cro 介导的切割产生的截短 La 蛋白的细胞内重新分布”J.
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Nonaka, T.: "Shigella flexineri YSH6000 induces two type of cell death, apoptosis and oncosis, in the differentiated human monoblastic cell U937"Microbiol. Lett.. 174. 89-95 (1999)
Nonaka, T.：“福氏志贺氏菌 YSH6000 在分化的人单核细胞 U937 中诱导两种类型的细胞死亡：细胞凋亡和肿瘤细胞死亡”Microbiol。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Kato, M.: "Caspases cleave the amino-terminal calpain inhibitory unit of calpastatin during apoptosis in human Jurkat T cells"J. Biochem.. 127. 297-305 (2000)
Kato, M.：“在人 Jurkat T 细胞凋亡过程中，半胱天冬酶会裂解钙蛋白酶抑制剂的氨基末端钙蛋白酶抑制单位”J.
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 6 条
    切断部位特異抗体と合成ペプチドを用いたポリペプチドC末端微量解析
    • 批准号：
      14658190
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $1.79万
    • 财政年份：
      2002
    • 负责人：
      大海 忍
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    切断部位特異抗体によるアポトーシス細胞の可視化とがん診断への応用
    • 批准号：
      12217032
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
    • 资助金额：
      $2.56万
    • 财政年份：
      2000
    • 负责人：
      大海 忍
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    ランダム配列に対する切断部位特異抗体を利用したプロテアーゼ基質の網羅的探索
    • 批准号：
      10163206
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
    • 资助金额：
      $1.28万
    • 财政年份：
      1998
    • 负责人：
      大海 忍
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    切断部位特異抗体を利用したアポトーシスプロテアーゼの標的分子の探索
    • 批准号：
      09878125
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $0.0万
    • 财政年份：
      1997
    • 负责人：
      大海 忍
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    海外基金