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白血球のスーパーオキシド産生系の分子機構

白细胞超氧化物产生系统的分子机制

基本信息

批准号：
05680520
负责人：
大海忍
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

食細胞のスーパーオキシド(O_2^-)産生は、形質膜に存在するシトクロムb_<558>に、細胞質の分子量47Kおよび65Kの蛋白質が刺激によって会合した、活性型O_2^-産生系によって触媒される。O_2^-産生系の活性化には、プロテインキナーゼC(PKC)による47K蛋白質のリン酸化が関与していると考えられているが、リン酸化部位を含めその詳細は明らかでない。今回は、ヒト好中球無細胞系でのドデシル硫酸ナトリウム(SDS)によって誘導されるO_2^-産生においてもPKCが関与している可能性があること、47K蛋白質のカルボキシル末端に近い部分にリン酸化がかかわる機能領域があることを明らかにした。1.種々のプロテインキナーゼの擬基質領域(pseudosubstrate region)のペプチドを化学合成し、SDSで刺激したヒト好中球無細胞系に加えると、PKCのβ分子種の擬基質領域が、PKCの活性を抑えるとともに、O_2^-産生を阻害した。この擬基質領域ペプチドは、PKCのα、β、およびγ分子種に作用するが、好中球にはPKCβ、特にβII分子種が主要に発現しているので、PKCβIIがO_2^-産生系の活性化にかかわっている可能性が高いと考えられる。2.47K蛋白質の一次構造に基づいて、PKCによってリン酸化されうるアミノ酸残基を含む部分の種々のペプチドを化学合成し、同様にして無細胞系でのO_2^-産生に対する影響を調べた。Ser-323を中心においた11残基のペプチドがO_2^-産生を阻害した。このとき加えたペプチドは、リン酸化を受けた。そこでSer-323のリン酸化がペプチドによるO_2^-産生系の阻害に関係しているか否かを調べるために、Ser-323をアラニンに置換したペプチド、およびSer-323にリン酸基を導入したリン酸化ペプチドをそれぞれ合成し、O_2^-産生に対する阻害効果をみたが、どのペプチドも同程度にO_2^-産生を阻害した。したがって47K蛋白質のこの領域は、活性化の際に分子間あるいは分子内で未知の領域とアミノ酸配列特異的に相互作用し、O_2^-産生系が活性型になると考えられる。

The production of food cells (O_2^-), the existence of plasma membrane, the presence of cytoplasm The molecular weight of the protein is 47K and 65K. O_2^-Production system activated には, プロテインキナーゼC (PKC) 47K protein のリThe details of acidification and acidification are as follows: This time, the cell-free cell line of ヒトトデシルsulfate ナトリウム (SDS) inducing されるO_2^-producing PKC is related to している possibility があること, 47K protein のカルボキシルEND にNearlyいPart of the にリン acidified がかかわるfunctional field があることを明らかにした. 1. Pseudosubstrate field region) chemical synthesis, SDS stimulation, good center ball cell-free system, P KC is a pseudo-matrix domain of β molecular species, PKC is an activity inhibitor, and O_2^-production is a hindrance.このMatrix field ペプチドは, PKCのα, β, およびγ molecular species にeffect するが, good ball PKCβ, special にβII molecular species The main reason is that the activation of PKCβII O_2^-production system is possible, and the possibility of activation is high. 2.47K protein's primary structure, PKC acid residue, and PKC acid residue. Separate and chemically synthesized products, same as the cell-free O_2^-produced and modified ones. Ser-323をCentral においた11 residue のペプチドがO_2^-produces を hindering した.このとき加えたペプチドは, リン acidified をReceived けた.そこでSer-323のリンAcidified がペプチドによるO_2^-Production system の hindering relationship しているか不かを动べるために、Ser-323をアラニンに Replacement したペプチド、およびSer-323 にリン acid group を introduction したリン acidification ペプチドをそれぞれ synthesis し, O_2^- The damage-blocking effect of the に対するをみたが and the どのペプチドも are of the same degree as にO_2^-The damage-blocking effect is produced. The domain of 47K protein, the domain of activation, the intermolecular domain, and the intramolecular domain are unknown. Domain とアミノ acid ligation-specific に-interaction し, O_2^-generation system が active type になると卡えられる.