切断部位特異抗体によるアポトーシス細胞の可視化とがん診断への応用

使用裂解位点特异性抗体可视化凋亡细胞及其在癌症诊断中的应用

• 批准号: 12217032
• 负责人: 大海 忍
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217032/
• 关键词: 抗体; タンパク質分解; アポトーシス; カスパーゼ; 合成ペプチド; 細胞死; 限定分解; 免疫組織染色

カスパーゼは,発がんとも深く関わるアポトーシスにおいて働く一連のプロテアーゼで,アスパラギン酸残基をC末端に持つポリペプチドを切り出す.本研究では,活性型カスパーゼあるいはその標的タンパク質に対する切断部位特異抗体を作成し,ヒト末梢血細胞や培養細胞系でがんの新しい診断法を目指したin situ解析を行った.カスパーゼによって切断されたポリ(ADPリボース)ポリメラーゼ(PARP)に対する切断部位特異抗体を用いてアポトーシスを誘導した培養細胞でのPARPの動態を観察することに成功した.その結果,(1)PARPは核で切断される,(2)切断で生じたDNA結合領域は核にとどまる,(3)触媒領域断片はアポトーシス進行とともに細胞質に遊離する,そして(4)アポトーシスにおけるPARPの動態は染色像によって少なくとも2つの段階に分けられることが判明した.また,Fas抗原の下流で活性化/プロテオリシスを受けるカスパーゼ8やその阻害タンパク質FLIPに対する切断部位特異抗体を使うと受容体を介したアポトーシスを起こしている細胞の選択的染色が可能であった.これらの抗体は組織細胞染色やイムノブロッティングだけでなくフローサイトメトリーにも利用できることがわかった.さらに,好中球アポトーシスに特異的なエラスターゼ切断型アクチンに対する抗体も確立し,種々の細胞が混在する病態組織標本を解析するための基盤が完成した.

There is a link between the acid residues and the C-end of the acid residues. The purpose of this study is to prepare the specific antibodies against the cutting site of the active cells, the cells of the peripheral blood, the cell lines of the cells, the new method of in situ analysis. Please tell me that the specific antibody against the cut site was not detected by ADP (PARP). The specific antibody of the cut site was successfully detected by using the cell culture PARP dynamic monitor. The results showed that: (1) the PARP was cut off, (2) the DNA was cut off in the field, (3) the fragments in the field of the catalyst were isolated, and (4) in the presence of each other, the results showed that the PARP dynamic staining was more accurate than that in the control group. Fas antigens have been activated

项目成果

Kishimoto,S.: "The inhibitory effect of prostaglandin E1 on oxidative stress-induced hepatocyte injury evaluated by calpain-mu activation"Transplantation. 69. 2314-2319 (2000)

Kishimoto,S.：“通过钙蛋白酶-mu 激活评估前列腺素 E1 对氧化应激诱导的肝细胞损伤的抑制作用”移植。

Inoue,Y.: "Molecular cloning and identification of bottle-nosed dolphin flavocytochrome bgp91(phox) and p22(phox) subunits"Veterinary Immunology and Immunopathology. 76. 137-150 (2000)

Inoue,Y.：“瓶鼻海豚黄细胞色素 bgp91(phox) 和 p22(phox) 亚基的分子克隆和鉴定”兽医免疫学和免疫病理学。

Yamada,M.: "Genetic studies of three Japanese patients with p22-phox-deficient chronic granulomatous disease : detection of a possible common mutant CYBA allele in Japan and a genotype-phenotype correlation in these patients"British Journal of Haematology

Yamada,M.：“三名患有 p22-phox 缺乏的慢性肉芽肿病的日本患者的遗传学研究：检测日本可能常见的突变 CYBA 等位基因以及这些患者的基因型-表型相关性”英国血液学杂志

Tamano,K.: "Supramolecular structure of the Shigella type III secrtion machinery : the needle part is changeable in length and essential for delivery of effectors"EMBO Journal. 19. 3876-3887 (2000)

Tamano,K.：“志贺氏菌 III 型切割机械的超分子结构：针部分的长度是可变的，对于传递效应器至关重要”EMBO 杂志。

Kato,M: "Caspases Cleave the Amino-Terminal Calpain Inhibitory Unit of Calpastatin during Apoptosis in Human Jurkat T Cells"Journal of Biochemistry. 127. 297-305 (2000)

Kato,M：“半胱天冬酶在人 Jurkat T 细胞凋亡过程中裂解 Calpastatin 的氨基末端钙蛋白酶抑制单位”生物化学杂志。