SH_3ドメインをもつアダプター蛋白質の活性化と高次構造変化のメカニズム

SH_3结构域接头蛋白的激活和构象变化机制

• 批准号: 10179216
• 负责人: 住本 英樹
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10179216/
• 关键词: SH_3ドメイン; p47^<phox>; p67^<phox>; p40^<phox>; Rac; シトクロームb_<558>; NADPHオキシダーゼ

本研究では、食細胞NADPHオキシダーゼ活性化に必須のSH3ドメイン含有蛋白質(p47^<phox>とp67^<phox>)の作用機構について検討し、平成10年度は特に以下の点を明らかにした。(1)p47^<phox>のSH3ドメインはC末端領域との分子内相互作用によりmaskされている。アラキドン酸あるいはC末端領域の3つのセリン残基のリン酸化は、分子内相互作用を切り、unmaskされたSH3ドメインを介してオキシダーゼ活性化のON/OFFを担う分子間相互作用(標的分子:オキシダーゼ酵素本体であるシトクロームb_<558>)を引き起すことを見い出した。(2)もう1つのスイッチは、p67^<phox>とGTP結合型Racの相互作用であり、この結合はp67^<phox>N末のTPRドメインを介して行われることを示した。(3)Racの活性化(GTP結合型への変換)を検出する新しい方法を開発し、この方法を用いてヒト好中球刺激時のRacの活性化はPl3キナーゼを介することを示した。(4)p47^<phox>のN末に新奇なドメイン(PB2ドメイン)を見い出し、このドメインがオキシダーゼ活性化の増強に働くことを明らかにした。(5)p40^<phox>(オキシダーゼ調節因子)は常にp67^<phox>と会合しているが、この結合は新奇なドメイン間(p40^<phox>のPCモチーフとp67^<phox>のPB1ドメイン)の全く新しいタイプの蛋白質間相互作用によることを見い出した。(6)更に共同研究によって、上記の新奇ドメイン(PB1及びPB2ドメイン)の3次構造を解明した。

This study で は, food cell NADPH オ キ シ ダ ー ゼ activeness に must の SH3 ド メ イ ン contains proteins (p47 ^ < phox > と p67 ^ < phox >) の role institutions に つ い て beg し 検, pp.47-53 10 year は に の point below を Ming ら か に し た. (1)p47^<phox> <s:1> SH3ドメ ドメ <s:1> c-terminal domain と <s:1> intramolecular interaction によ によ maskされて る る る. ア ラ キ ド ン acid あ る い は の 3 C terminal field つ の セ リ ン residues の リ ン acidification は, intramolecular interaction を り, unmask さ れ た SH3 ド メ イ ン を interface し て オ キ シ ダ ー ゼ activeness の ON/OFF を bear う intermolecular interactions (target molecules: オ キ シ ダ ー ゼ enzyme ontology で あ る シ ト ク ロ ー ム b_ < 558 > Youdaoplaceholder0 cite を from す す とを とを see を exit from た た. (2) も う 1 つ の ス イ ッ チ は, p67 ^ < phox > と GTP type combined with Rac made の interaction で あ り, こ の combining は p67 ^ < phox > N の at the end of the TPR ド メ イ ン を interface し て line わ れ る こ と を shown し た. (3) the Rac の activeness (GTP type combination made へ の variations in) を 検 out す る new し い method を open 発 し, こ の way を with い て ヒ ト stimulation of good の Rac の activeness は Pl3 キ ナ ー ゼ を interface す る こ と を shown し た. (4) p47 ^ < phox > の N に at the end of the novel な ド メ イ ン (PB2 ド メ イ ン) を see い し, こ の ド メ イ ン が オ キ シ ダ ー ゼ activeness の raised strong に 働 く こ と を Ming ら か に し た. (5) p40 ^ < phox > (オ キ シ ダ ー ゼ adjustment factor) は often に p67 ^ < phox > meet と し て い る が, こ の combining は novel な ド メ イ ン between (p40 ^ < phox > の PC モ チ ー フ と p67 ^ < phox > の PB1 ド メ イ ン) の く all new し い タ イ プ の protein interaction between に よ る こ Youdaoplaceholder0 see とを out of た. (6) Further に jointly studied によって, and recorded the three times of novel ドメ <s:1> <s:1> (PB1 and びPB2ドメ <s:1>) を construction を to explain た.

项目成果

Yasushi Kikuta: "Purification and characterization of Recomebinant Human Neutrophil Leukotriene B_4 ω-Hydroxylase (Cytochrome p450 4F3)" ARCHIVES OF BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS. 355・4. 201-205 (1998)

Yasushi Kikuta：“重组人中性粒细胞白三烯 B_4 ω-羟化酶（细胞色素 p450 4F3）的纯化和表征”生物化学和生物物理学档案 355・4（1998）。

Rila Nakamura: "The PC motif:a novel and evolutionarily conserved sequence in volved in interaction between p40^<phox> and p67^<phox>,SH3 domain-containing cytosolic factors of the phagocyte NADPH oxidase" European Journal of Biochemistry. 583-589 (1998)

Rila Nakamura：“PC 基序：一种新颖且进化上保守的序列，涉及 p40^<phox> 和 p67^<phox> 之间的相互作用，吞噬细胞 NADPH 氧化酶的含有 SH3 结构域的胞质因子”《欧洲生物化学杂志》。

Izuhara,K.: "Association of the interleukin-4 receptor α chain with p47^<phox>,an activator of the phagocyte NADPH o xidase in B cells" Molecular Immunology. in press. (1999)

Izuhara, K.：“白细胞介素 4 受体 α 链与 B 细胞中吞噬细胞 NADPH 氧化酶的激活剂 p47^<phox> 的关联”，出版中的分子免疫学 (1999)。