HDLによる細胞コレステロール搬出系におけるカベオリンの意義

小窝蛋白在 HDL 细胞胆固醇输出系统中的意义

• 批准号: 10877179
• 负责人: 堀内 正公
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877179/
• 关键词: カベオリン; マクロファージ; 動脈硬化; 泡沫細胞; コレステロ

カベオリン-1はアミノ酸178個からなり、中央部の細胞膜結合ドメイン(アミノ酸102-134)を介して細胞膜に結合し、N末端及びC末端を細胞質側に向けたヘアピン状の構造をとると考えられている。機能ドメインとして、2つのへリックスドメイン(アミノ酸28-56、並びに57-75)、Ras蛋白結合ドメイン(アミノ酸82-101)、上述の細胞膜結合ドメイン、及びコレステロールセンシングドメイン(アミノ酸119-122)が言われているが、これら各ドメインの生細胞内での役割、特にコレステロール代謝平衡に関わる機能については、直接的な生化学的証明がない。本研究では、1. イヌカベオリン-1cDNAをクローニングし、c-Myc及び7つのヒスチジンかなるtagを付加した後、動物細胞系の発現ベクターpcDNA3に組み込み、カベオリン-1発現プラスミドを構築した。2. PfuDNAポリメラーゼによるPCRと、鋳型のメチル化DNAを特異的に断するDpnIを用いた部位特異的変異導入法によって、上記のヘワックスドメイン、Ras蛋白結合ドメイン、細胞膜結合ドメイン、及びコレステロールセンシングドメインを選択的に欠失さたカベオリン-1欠失変異体を作製した。3. これらの欠失変異体、並びにカベオリン-1全長をCOS-7細胞に一過性に過剰発現させる実験系を確立した。現在、アビジンによって細胞膜蛋白を標識した後、遠心法による細胞分画を行い、リコンビナントカベオリン-1の細胞内分布、並びに細胞膜遊離コレステロールの増減を検討中である。予備的検討の結果では、カベオリン-1の過剰発現は、細胞遊離コレステロールのefflux更にはinfluxに著明に影響し、特に一番目のへワックスドメインの欠失変異体は、ドミナントアクティブに機能することが示唆されている。

178 cell membrane binding sites (102-134) in the central part of the cell membrane binding site, N-terminal and C-terminal cytoplasmic structure. Function: 1. Ras protein binding protein (Ras 28-56, Ras 57-75) The above mentioned cell membrane binding agents (AC82 -101), and the above mentioned cell membrane binding agents (AC119 -122) are the direct biochemical proof of the function related to the metabolic balance of each agent in the living cells. This study is 1. After the addition of c-Myc, c-Myc and c-Myc tags, the development of animal cell lines was established. 2. Pfu DNA diversity analysis is based on site-specific PCR, DpnI, and Ras protein binding, cell membrane binding, and cell cycle selection. 3. This is the first time that the gene has been detected in COS-7 cells. Now, after the identification of cell membrane proteins, the analysis of cell separation, the intracellular distribution of cell membrane proteins, and the increase of cell membrane free proteins are discussed. The results of the preliminary study showed that there was no change in the expression of cell free radicals, no change in the expression of cell free radicals, no change in the expression of cell free radicals, and no change in the expression of cell free radicals.

项目成果

Takeshi Biwa et al.: "Induction of murine macrophage growth by oxidized low density lipoprotein is mediated by granulocyte macrophage colony-stimulating factor." The Journal of Biological Chemistry. 273. 28305-28313 (1998)

Takeshi Biwa 等人：“氧化低密度脂蛋白诱导小鼠巨噬细胞生长是由粒细胞巨噬细胞集落刺激因子介导的。”

Yi Ding et al.: "Reduced expression of the macrophage scavenger receptors in macrophage-like cell mutants resistant to brefeldin A." Biochemical and Biophysical Research Communications. 243. 277-283 (1998)

Yi Ding 等人：“对布雷菲德菌素 A 具有抗性的巨噬细胞样细胞突变体中巨噬细胞清道夫受体的表达减少。”

Hirofumi Matsuda et al.: "Molecular cloning,functional expression and tissue distribution of rat acyl-coenzyme A:cholesterol acyltransferase." Biochimica Biophysica Acta. 1391. 193-203 (1998)

Hirofumi Matsuda 等：“大鼠酰基辅酶 A：胆固醇酰基转移酶的分子克隆、功能表达和组织分布。”

Akira Miyazaki et al.: "Expression of ACAT-1 protein in human atherosclerotic lesions and cultured human monocytes-macrophages." Arteriosclerosis,Thrombosis,and Vascular Biology. 18. 1568-1574 (1998)

Akira Miyazaki 等人：“ACAT-1 蛋白在人动脉粥样硬化病变和培养的人单核细胞-巨噬细胞中的表达。”

Takashi Kawasaki et al.: "Biochemical evidence for oligomerization of rat adrenal acyl-coenzyme A:cholesterol actyltransferase." Biochemical and Biophysical Research Communications. 244. 347-352 (1998)

Takashi Kawasaki 等人：“大鼠肾上腺酰基辅酶 A：胆固醇酰基转移酶寡聚化的生化证据。”