プロセシングプロテアーゼ,PACE4(SPC4)の発現調節と細胞機能制御

加工蛋白酶 PACE4 (SPC4) 的表达和细胞功能的调节

• 批准号: 11144226
• 负责人: 松田 佳子
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11144226/
• 关键词: プロテアーゼ; サチライシン様プロテアーゼ; SPC4; PACE4; アルブミン; 細胞分化; 転写調節; プロセシング

1.PACE4遺伝子発現調節に重要なbHLH型転写因子の同定今までに各種培養細胞(HepG2,GH_4C_1,神経芽腫細胞)におけるルシフェラーゼアッセイ系を用いた5'-上流域の機能解析の結果,12ケのE-boxモチーフのうち,特にE4からE9までのE-boxクラスターはネガティブなエンハンサーとして,またE10はポジティブなエンハンサーとして機能していることが判明している.塩基配列の変異による実験でもこれらの転写因子はE-boxモチーフ(CANNTG)に特異的であることが確認され,bHLH型転写因子はその最も有力な候補である.転写因子の精製,抗体による転写因子の同定,共発現実験による転写活性の影響等の実験により,各細胞におけるbHLH型転写因子の同定とその役割を解明した.2.アンチセンスRNAによるPACE4発現制御と前駆対プロセシングの変化最近申請者らは,PACE4を発現しているHepG2細胞にアンチセンスRNAを発現させた系を構築し,HepG2が培養液に分泌するタンパク質を二次元電気泳動,ウエスタンプロットで解析した結果,PACE4は肝臓においてプロアルブミンをアルブミンにプロセスする反応に関与することを証明した.同様な系を,下垂体由来GH_4C_1細胞及び神経芽腫GANB細胞に構築し,PACE4がプロセシングに関与するペプチドホルモン,ニューロペプチド,成長因子の候補分子を同定した.

1. PACE4 posthumous son 伝 発 now important な に bHLH type planning write factor の with fixed today ま で に various cultured cells (HepG2, GH_4C_1, god 経 buds swell cells) に お け る ル シ フ ェ ラ ー ゼ ア ッ セ を イ department with い た 5 '- analytical の の function on the basin as a result, the 12 ケ の E - box モ チ ー フ の う ち, trevor に E4 か ら E9 ま で の E - box ク ラ ス タ ー は ネ ガ テ ィ ブ な エ ン ハ ン サ ー と し て, ま た E10 は ポ ジ テ ィ ブ な エ ン ハ ン サ ー と し て function し て い る こ と が.at し て い る. Salt base with column の - different に よ る be 験 で も こ れ ら の planning write factor は E - box モ チ ー フ (CANNTG) に specific で あ る こ と が confirm さ れ, bHLH type planning write factor は そ の も most powerful な alternate で あ る. Planning to write factor の refined, antibody に よ る planning write factor の with calm, total 発 now be 験 に よ る の planning write activity such as の be 験 に よ り, each cell に お け る bHLH type planning write factor の with fixed と そ cut を の service interpret し た. 2. ア ン チ セ ン ス RNA に よ る PACE4 発 now before the system of imperial と 駆 プ seaborne ロ セ シ ン グ の - the recent applicants ら は, PA CE4 を 発 now し て い る HepG2 cells に ア ン チ セ ン ス RNA を 発 now さ せ た を build し, HepG2 に が cultures of secretion す る タ ン パ ク qualitative を secondary yuan electric 気 swimming, ウ エ ス タ ン プ ロ ッ ト で parsing し た results, PACE4 は routine liver に お い て プ ロ ア ル ブ ミ ン を ア ル ブ ミ ン に プ ロ セ ス す る anti 応 に masato And する とを とを prove that た. With others in な を, pituitary origin GH_4C_1 cells and び god 経 buds swell GANB に build し PACE4 が プ ロ セ シ ン グ に masato and す る ペ プ チ ド ホ ル モ ン, ニ ュ ー ロ ペ プ チ ド, growth factor の alternate molecular を be し た.

项目成果

Tsuji, A. et al.: "Inactivation of Proprotein Convertase, PACE4 by α1-Antitrypsin Portlan (α1-PDX), a Blocker of Proteolytic Activation of Bone Morphogenetic Protein during Embryogenesis."J. Biochem.. 126. 591-603 (1999)

Tsuji, A. 等人：“α1-抗胰蛋白酶 Portlan (α1-PDX) 使前蛋白转化酶 PACE4 失活，它是胚胎发生过程中骨形态发生蛋白蛋白水解激活的阻断剂。J. Biochem.. 126. 591-603 ( 1999）

Tsuji,A.et al.: "Human Subtilisin-like Proprotein Convertase,PACE4(SPC4) Gene Expression is Highly Regulated Through E-box Elements in HepG2 and GH4C1 cells"J.Biochem.. 126. 494-502 (1999)

Tsuji,A.et al.：“人枯草杆菌蛋白酶样前蛋白转化酶，PACE4(SPC4) 基因表达在 HepG2 和 GH4C1 细胞中通过 E-box 元件高度调节”J.Biochem.. 126. 494-502 (1999)

Mori, K. et al.: "Subtilisin-like proprotein convertase, PACE4 and PC8, as well as furin, are endogenous proalbumin convertases in HepG2 cells."J. Biochem.. 125. 627-633 (1999)

Mori, K. 等人：“枯草杆菌蛋白酶样前蛋白转化酶、PACE4 和 PC8 以及弗林蛋白酶，是 HepG2 细胞中的内源性白蛋白原转化酶。”