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プロセシングプロテアーゼ・PACE4の遺伝子,cDNA及び蛋白質の構造

加工蛋白酶PACE4的基因、cDNA和蛋白结构

基本信息

批准号：
08680656
负责人：
松田佳子
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680656/
关键词：
PACE4 アイソフォームスクリーニング転写制御因子

项目摘要

PACE4アイソフォームは,PACE4Aの触媒部位とHomoBと呼ばれるファミリー間で相同性の高い部位を全て共有しているが,3′末端の塩基配列がそれぞれ異なっている.PACE4アイソフォームの中でPACE4A,4C,4DのcDNAクローニングは完了しているが,新たに発見したアイソフォームPACE4EのcDNAはヒト小脳cDNAライブラリーよりスクリーニングして発見したものである.しかし,3′末端よりHomoB領域までしかコードしていないので,新たにヒト胎児脳のcDNAライブラリーよりPACE4Eの全長を含むcDNAクローンのスクリーニングを行った.上記で得られたPACE4の各アイソフォームcDNAの構造より推定されるアミノ酸配列から,それぞれのアイソフォームに特異的アミノ酸配列を選びペプチドを合成し,それぞれに対する特異抗体を作製し,免疫組織化学によりPACE4アイソフォームの組織での発現を明らかにした.PACE4アイソフォームの構造解析と発現調節のために,ヒトゲノムライブラリーよりPACE4遺伝子を同定し,エキソン,イントロン構造を解析し,さらに5′上流からプロモーター領域を推定した.CATアッセイ,ゲルシフトアッセイ,フットプリント法によりPACE4のエンハンサー領域,転写制御因子の同定を行った.上記実験で得られたPACE4アイソフォームのcDNAを用いて,細胞内での発現系を確立し,その酵素としての能力を確かめた.さらに,遺伝子工学的に変異蛋白質を発現させ,その構造と機能の解析を行った.

PACE4 protein sequence is completely different from that of PACE4A in the catalytic region and HomoB in the 3 ′ terminal region. The cDNA sequence of PACE4A,4C,4D in PACE4 protein sequence is completely different from that of PACE 4E in the 3 ′ terminal region. The 3 ′ terminal end of the HomoB domain is located in the middle of the new domain, and the full length of PACE4E contains the cDNA library. The structure of the cDNA encoding each protein of PACE4 was estimated to be different from that of PACE4, and the specific protein of PACE4 was selected and synthesized, and the specific antibody of PACE4 was produced by immunohistochemistry. The analysis of the structure of PACE4 gene is carried out in the same way as that of PACE4 gene, and the estimation of the domain of PACE 4 gene is carried out in the same way as that of PACE 4 gene. The above results show that the gene encoding PACE4 is used to establish the expression system in cells, and the enzyme activity is confirmed. Today, the development of different proteins in genetic engineering and the analysis of their structure and function are carried out.