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ヒスチジン脱炭酸酵素における小胞体への翻訳後ターゲティングの調節機構

组氨酸脱羧酶翻译后靶向内质网的调控机制

基本信息

批准号：
11153210
负责人：
市川厚
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度の研究実施計画に基づき、以下の研究成果を得た。1.翻訳後ターゲティングの調節機構の解析:[^<35>S]メチオニン標識ヒスチジン脱炭酸酵素(HDC)を調製し、細胞質成分と反応させて標識HDCのイヌ膵臓ミクロソーム膜への移行を検討した。その結果、HDCの移行反応にATPの加水分解反応が必要であることがわかった。また、抗Hsc70抗体を用いての免疫沈降実験により、HDCの移行反応に熱ショック蛋白のHsc70が関与していることを明らかにした。2.小胞体移行シグナルの同定:すでに、これまでの実験で、小胞体移行におけるHDCのC-末端鎖の関与を明らかにしている。本年は、C-末端鎖の移行シグナルを有するドメインが、C-末端鎖の588番目から607番目までの20アミノ酸残基であることを明らかにした。さらに、このドメインを含むC-末端鎖ペプチドをGFP融合タンパクとして作成し、蛍光抗体法により細胞観察を行うことにより、20アミノ酸残基を含むC-末端鎖ドメインが小胞体に移行することを確認した。3.翻訳後ターゲティングに関与する分子シャペロンの検索:GST融合タンパクを用いたpull-down assay法により、ラット好塩基球細胞株RBL-2H3の細胞質から、HDCのC-末端鎖ドメインに結合する2種類のタンパク質(分子量70kDaおよび60kDa)を見出した。さらに、HDCのC末端鎖ペプチドから小胞体移行シグナルである20アミノ酸残基を除くと、上記2種類のタンパク質の示す結合活性は消失することを明らかにした。

This year's research project is based on the following "research results". 1. After the flip-flop, the information system was analyzed: [^ & lt;35>S] the identification of decarbonate enzyme (HDC) was detected, and the components of the cell were identified as HDC. The membrane was transferred to the cell. The results show that it is necessary for HDC to transfer to ATP and to decompose water. Anti-Hsc70 antibody, anti-Hsc70 antibody and anti-Hsc70 antibody were used to immunize, and immunize. two。 The migration of small cell bodies is the same as that of small cell body migration, HDC C-terminal transition, and so on. This year, there are two kinds of acid residues in the C-terminal, such as 588 orders, 607 orders, and acid residues. It contains the C-terminal, the GFP fusion, the photoantibody, the acid residue, the C-terminal, the migration of the small cell and the confirmation. 3. After the fusing of GST, we used the method of pull-down assay to detect the molecular weight of the fusion gene, the cell line of RBL-2H3, the cell line of HDC-C, and the molecular weight of 70kDa (molecular weight of DNA). The transfer of small cell bodies at the C-terminal of HDC and the presence of acid residues at the C-terminal of the virus was detected in combination with the elimination of acid residues, the removal of acid residues and the removal of acid residues at the C-terminal of the HDC.