ヒスチジン脱炭酸酵素における小胞体への翻訳後ターゲティングの調節機構

组氨酸脱羧酶翻译后靶向内质网的调控机制

• 批准号: 11153210
• 负责人: 市川 厚
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11153210/
• 关键词: 翻訳後ターゲティング; ヒスチジン脱炭酸酵素; 熱ショック蛋白; 小胞体移行シグナル; GST融合タンパク; pull-down assay法; ラット好塩基球細胞株; GFP融合タンパク

本年度の研究実施計画に基づき、以下の研究成果を得た。1.翻訳後ターゲティングの調節機構の解析:[^<35>S]メチオニン標識ヒスチジン脱炭酸酵素(HDC)を調製し、細胞質成分と反応させて標識HDCのイヌ膵臓ミクロソーム膜への移行を検討した。その結果、HDCの移行反応にATPの加水分解反応が必要であることがわかった。また、抗Hsc70抗体を用いての免疫沈降実験により、HDCの移行反応に熱ショック蛋白のHsc70が関与していることを明らかにした。2.小胞体移行シグナルの同定:すでに、これまでの実験で、小胞体移行におけるHDCのC-末端鎖の関与を明らかにしている。本年は、C-末端鎖の移行シグナルを有するドメインが、C-末端鎖の588番目から607番目までの20アミノ酸残基であることを明らかにした。さらに、このドメインを含むC-末端鎖ペプチドをGFP融合タンパクとして作成し、蛍光抗体法により細胞観察を行うことにより、20アミノ酸残基を含むC-末端鎖ドメインが小胞体に移行することを確認した。3.翻訳後ターゲティングに関与する分子シャペロンの検索:GST融合タンパクを用いたpull-down assay法により、ラット好塩基球細胞株RBL-2H3の細胞質から、HDCのC-末端鎖ドメインに結合する2種類のタンパク質(分子量70kDaおよび60kDa)を見出した。さらに、HDCのC末端鎖ペプチドから小胞体移行シグナルである20アミノ酸残基を除くと、上記2種類のタンパク質の示す結合活性は消失することを明らかにした。

This year 's <s:1> research implementation plan に is based on づ づ, and the following <s:1> research results を obtain た. 1. After turn 訳 タ ー ゲ テ ィ ン グ の regulator の analytic: [^ < > 35 S] メ チ オ ニ ン logo ヒ ス チ ジ ン decarburization acid enzyme (HDC) を し modulation, cytoplasmic components と 応 さ せ て logo HDC の イ ヌ Cui viscera ミ ク ロ ソ ー ム membrane へ の transitional を beg し 検 た. Youdaoplaceholder0 そ result, HDC <e:1> transition reverse 応にATP <e:1> addition water decomposition reverse 応が necessary である った とがわ った った った. を ま た, resisting Hsc70 antibody with い て の immune sink be 験 に よ り, HDC の transitional anti 応 に hot シ ョ ッ ク protein の Hsc70 が masato and し て い る こ と を Ming ら か に し た. 2. Small cell body transitional シ グ ナ ル の with: す で に, こ れ ま で の be 験 で, small cell body transitional に お け る HDC の C - end lock の masato Ming ら を か に し て い る. は, C this year - end lock の transitional シ グ ナ ル を have す る ド メ イ ン が, C - end lock の 588's mesh か ら 607's mesh ま で の 20 ア ミ ノ acid residues で あ る こ と を Ming ら か に し た. さ ら に, こ の ド メ イ ン を む C - end lock ペ プ チ ド を GFP fusion タ ン パ ク と し て made し, 蛍 light antibody に よ り cell line 観 examine を う こ と に よ り, 20 ア ミ ノ acid residues を む C - end lock ド メ イ ン が small cell body に transitional す る こ と を confirm し た. 3. After turn 訳 タ ー ゲ テ ィ ン グ に masato and す る molecular シ ャ ペ ロ ン の 検 suo: GST fusion タ ン パ ク を with い た pull - down Assay method に よ り, ラ ッ ト good salt base ball cell lines RBL - 2 h3 の cytoplasm か ら, HDC の C - end lock ド メ イ ン に combining す る 2 kinds の タ ン パ ク mass (molecular weight 70 kda お よ び 60 kda) を shows し た. さ ら に, HDC の C end lock ペ プ チ ド か ら small cell body transitional シ グ ナ ル で あ る 20 ア ミ ノ acid residues を except く と, 2 species written の タ ン パ ク qualitative の は shown す combining disappeared す る こ と を Ming ら か に し た.

项目成果

Hasegawa,H.,et al.: "Opposite Regulation of Transepithelial Electrical Resistance and Paracellular Permeability by Rho in Madin-Darby Canine Kidney Cells"J.Biol.Chem.. 274・30. 20982-20988 (1999)

Hasekawa, H.等人：“Madin-Darby犬肾细胞中Rho对跨上皮电阻和细胞旁通透性的相反调节”J.Biol.Chem.274・30(1999)。

Tanaka, S., et al.: "Intracellurlar Localization of the 74- and 53-kDa Forms of L-Histidine Decarboxylase in a Rat Basophilic/Mast Cell Line, RBL-2H3"J. Biol. Chem.. 273・14. 8177-8182 (1998)

Tanaka, S., et al.：“大鼠嗜碱性/肥大细胞系 RBL-2H3 中 L-组氨酸脱羧酶的 74-和 53-kDa 形式的细胞内定位”J. Biol. 273・14。 8177-8182 (1998)

Suzuki, S., et al.: "Membrane targeting and binding of the 74-kDa form of mouse L-histidine decarboxylase via its carboxyl-terminal sequence"FEBS Lett.. 437. 44-48 (1998)

Suzuki, S., et al.：“通过其羧基末端序列对 74-kDa 形式的小鼠 L-组氨酸脱羧酶进行膜靶向和结合”FEBS Lett.. 437. 44-48 (1998)

Ohuchi,Y.,et al.: "Induction of histidine decarboxylase in type 2 T helper lymphocytes treated with anti-CD3 antibody." Inflamm.Res.47・1. S48-S49 (1998)

Ohuchi, Y., et al.：“用抗 CD3 抗体处理的 2 型 T 辅助淋巴细胞中组氨酸脱羧酶的诱导”。Inflamm.Res.47·1（1998）。

Ichikawa,A.,et al.: "Benzamidine-sensitive proteinase in activated cleavage of recombinant 74kDa histidine decarboxylase into its 53kDa form in mastocytoma cells." Inflamm.Res.47・1. S46-S47 (1998)

Ichikawa, A., et al.：“在肥大细胞瘤细胞中，苯脒敏感蛋白酶将重组 74kDa 组氨酸脱羧酶激活裂解为 53kDa 形式。”Res.47·1 (1998)。