小胞体の品質管理機構に関与する分子シャペロンの解析

内质网质量控制机制中分子伴侣的分析

• 批准号: 11153222
• 负责人: 徳永 文稔
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Himeji Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11153222/
• 关键词: 小胞体関連分解; 小胞体の品質管理機構; 分子シャペロン; プロテアソーム; 核内凝集体; ERp72; カルネキシン

近年、小胞体内の折りたたみ異常蛋白質は、分子シャペロンにより識別され、細胞質へ逆行輸送後、プロテアソーム分解されることが明らかになり、この機構は小胞体関連分解と呼ばれる。本研究で我々は、抗血栓薬(ワルファリン)下におけるγ-カルボキシル化不全プロテインCをモデル蛋白として、小胞体関連分解における分子シヤペロンの役割を解析した。まず、BiP、ERp72、PDIをそれぞれ高発現したCHO細胞におけるプロテインCの品質管理を調べたところ、全てのシヤペロン高発現細胞でビタミンK下でも分泌が抑制され、部分的な細胞内分解が見られた。また、ワルファリン下ではERp72高発現細胞では野生型より2倍早く分解されたが、BiPやPDI高発現細胞では分解が遅延した。ERp72高発現細胞で見られた分解促進はシステインプロテアーゼ活性によるものではなく、最終的にはプロテアソーム分解を受けた。また、ERp72高発現細胞ではプロテインCとカルネキシン・カルレティキュリンとの会合が抑制されていた。これらの結果は、従来機能不明であったERp72がカルネキシン・サイクルに抑制的に働き、小胞体関連分解を促進する機能を持つことを示唆した。さらに、プロテインCの分解シグナルをもつL鎖とGEPとを融合させたキメラ蛋白(LC-GFPと略)を用いて逆行輸送過程を解析したところ、プロテアソーム阻害割下ではLC-GFPは経時的に核内凝集体を形成した。この凝集体近傍にはプロテアソームが局在すること、また凝集体は核内でもND/PML bodyと呼ばれる特異的部位に蓄積することを明らかにした。この部位は各種神経変性病因蛋白質群の蓄積する部位であり、小胞体関連分解における異常蛋白質の除去機構と神経変性病の成因に共通項があると示唆された。

In recent years, small cell in the body の fold り た た は み abnormal proteins, molecular シ ャ ペ ロ ン に よ り recognition さ れ, cytoplasm after へ retrograde transport, プ ロ テ ア ソ ー ム decomposition さ れ る こ と が Ming ら か に な り, こ の institutions は small cell body masato even decomposition と shout ば れ る. , this study で I 々 は 薬 (ワ ル フ ァ リ ン) under に お け る gamma カ ル ボ キ シ ル not perfect プ ロ テ イ ン C を モ デ ル protein と し て, small cell body masato even decomposition に お け る molecular シ ヤ ペ ロ ン の service cut を parsing し た. ま ず, BJP, ERp72, PDI を そ れ ぞ れ high 発 now し た CHO cells に お け る プ ロ テ イ ン C の quality management を adjustable べ た と こ ろ, whole て の シ ヤ ペ ロ ン high 発 now cells で ビ タ ミ ン K under で が も secretion inhibition さ れ, partial な cell decomposition が see ら れ た. Under ま た, ワ ル フ ァ リ ン で は ERp72 high 発 now cells で は wild-type よ り 2 times earlier く decomposition さ れ た が, BJP や high PDI 発 now cells で は decomposition が 遅 delay し た. High ERp72 発 cell で now see ら れ た decomposition promote は シ ス テ イ ン プ ロ テ ア ー ゼ active に よ る も の で は な く, eventually に は プ ロ テ ア ソ ー ム decomposition を by け た. ま た, high ERp72 発 now cells で は プ ロ テ イ ン C と カ ル ネ キ シ ン · カ ル レ テ ィ キ ュ リ ン と meet の が inhibit さ れ て い た. こ れ ら の results は, 従 to functional unknown で あ っ た ERp72 が カ ル ネ キ シ ン · サ イ ク ル に inhibition of に 働 き, small cell body masato even decomposition を promote す る function を hold つ こ と を in stopping し た. さ ら に, プ ロ テ イ ン C の decomposition シ グ ナ ル を も つ L lock と GEP と を fusion さ せ た キ メ ラ protein (LC - GFP と slightly) を with い て retrograde transport process analytical し を た と こ ろ, プ ロ テ ア ソ ー ム resistance against cut で は LC - GFP は 経 し に nuclear condensation within the collective を formation during た. こ の coagulation collective nearly alongside に は プ ロ テ ア ソ ー ム が bureau in す る こ と, ま た condensation within the collective は nuclear で も ND/PML body と shout ば れ る specific parts of the accumulation of に す る こ と を Ming ら か に し た. は various god 経 こ の parts - STD because of accumulation of protein group の す る parts で あ り, small cell body masato even decomposition に お け る abnormal protein の remove institutional と 経 god - common causes venereal の に item が あ る と in stopping さ れ た.

项目成果

宮田 敏行: "凝固第V・VIII因子合併欠乏症"血液・腫瘍科. 38・4. 369-401 (1999)

Toshiyuki Miyata：“凝血因子 V 和 VIII 的复杂性缺乏”，血液学和肿瘤学 38・4（1999）。

Shirotani, H.: "Cellular and functional characterization of three recombinant antithrombin mutants that caused pleiotro ic effect-rype deficienc"J. Biochem. (Tokyo). 125・2. 253-262 (1999)

Shirotani, H.：“导致多效效应缺陷的三种重组抗凝血酶突变体的细胞和功能特征”J. Biochem.（东京）125·262（1999）。

Kondo,S.: "Factor XII Tenri,A novel cross-reacting material negative factor XII deficiency,occurs through a proteasome-mediated degradation"Blood. 93・12. 4300-4308 (1999)

Kondo, S.：“因子 XII Tenri，一种新型交叉反应物质阴性因子 XII 缺陷，通过蛋白酶体介导的降解发生”血液 93・12 4300-4308 (1999)。

徳永 文稔: "ユビキチン/プロテアソームによる蛋白質の品質管理機構"蛋白質核酸酵素. 44・6. 766-775 (1999)

Fuminoshi Tokunaga：“泛素/蛋白酶体的蛋白质质量控​​制机制”蛋白质核酸酶44・6（1999）。

徳永 文稔: "遺伝性疾患に見られるタンパク質の分子異常と小胞体関連分解"臨床化学. 28・2. 69-77 (1999)

Fumitoshi Tokunaga：“遗传疾病中发现的蛋白质分子异常和内质网相关降解”《临床化学》28・2（1999）。