小胞体ストレス応答性新規蛋白質Herp及びRTPに関する研究

新型内质网应激反应蛋白Herp和RTP的研究

• 批准号: 11153231
• 负责人: 小亀 浩市
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: National Cardiovascular Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11153231/
• 关键词: 血栓症; ホモシステイン; 血管内皮細胞; 遺伝子発現; 小胞体ストレス; 分子シャペロン; RTP; Herp

血栓症の危険因子として、高ホモシステイン血症が知られている。近年私達は、血管内皮細胞のホモシステイン刺激及び小胞体ストレス負荷で発現量が増加する新規蛋白質Herp及びRTPを発見した。そこで本研究は、「小胞体ストレス応答機構の解明」「両蛋白質の機能探索」「高ホモシステイン血症の病態発症機序解明」を主目的として計画された。以下に成果を列記する。【Herp及びRTPの転写調節機構】レポータージーンアッセイによって、Herp遺伝子においても既知の小胞体ストレス応答シスエレメントERSEが機能していること、さらに新規エレメントERSE-IIも関与していることを見出した。両エレメントが相加的に働くらしい。一方、RTP遺伝子にはいずれの配列も存在せず、別のエレメントあるいは転写以外の段階で発現調節されている可能性が示唆された。【Herpの小胞体局在】Herpは、他の小胞体ストレス蛋白質と異なり、小胞体膜に局在する。そのトポロジーを解析すると、分子の大部分が細胞質に露出していることが明らかになった。これは、Herpが小胞体内腔の蛋白質に対してシャペロン様活性を発揮しない可能性を示す。【RTP相互作用蛋白質の同定】酵母Two-Hybird系を利用してRTP相互作用蛋白質の同定を試みたが、陽性クローンは得られなかった。【RTPのリン酸化】RTPのリン酸化残基を特定するため、多くのRTP変異体発現ベクターを構築した。現在、解析進行中である。【高ホモシステイン血症と小胞体ストレス】高ホモシステイン血症患者の繊維芽細胞におけるHerp、RTP、GRP78量を正常群と比較したところ、病態差よりも個体差が大きかった。【Herpノックアウトマウス作成準備】マウスHerpの遺伝子構造を調べ、Herp欠損マウス作成用ベクターを構築した。現在、ES細胞のスクリーニング中である。以上の成果を基盤に研究を進め、Herp及びRTPの生理機能や病態との関連解明を目指す。

Thrombosis risk factors, high blood sugar, high blood sugar, high blood sugar, In recent years, the development of new proteins Herp and RTP has increased due to the stimulation of vascular endothelial cells and the increase of cellular load. The main objectives of this study are: "Understanding the mechanism of microcellular response,""Exploring the function of protein," and "Understanding the pathological mechanism of hyperglycemia." The results are listed below. [Herp and RTP's Writing and Regulating Mechanism] Herp's Writing and Regulating Mechanism is a new way to improve ERSE-II's functionality.両エレメントが相加的に働くらしい。In one case, RTP is not included in the list, and the other is not included in the list. [Herp's small cell structure] Herp's small cell structure is different from other protein structure and small cell membrane structure. Most of the molecules are exposed to the cytoplasm. This is an indication of the possibility of protein expression in the microcellular space. [Identification of RTP interacting proteins] Yeast Two-Hybrid system uses RTP interacting proteins to identify proteins. [RTP deacidification] RTP deacidification residues are specified and multiple RTP deacidification residues are constructed. Now, the analysis is in progress. The amount of Herp, RTP and GRP78 in the vascular cells of patients with high blood pressure is higher than that of normal group and abnormal group. [Herp Now, ES cells are in the middle of a crisis. These results provide a basis for further research, understanding the relationship between the physiological functions of Herp and RTP.

项目成果

Chiemi Hine: "Monkey hepatocytes efficiently express tissue factor pathway inhibitor (TFPI), in contrast with human and rat hepatocytes"J. Biochem.. 125(6). 1039-1047 (1999)

Chiemi Hine：“与人类和大鼠肝细胞相比，猴肝细胞有效表达组织因子途径抑制剂 (TFPI)”J.

小亀浩市: "蛋白質の分析に有用な各種の手法"血液・腫瘍科. 40(S.3). 201-209 (2000)

Hiroshi Ogame：“用于蛋白质分析的各种方法”，血液学和肿瘤学 40(S.3) (2000)。

Kazuomi Kario: "Lipid-lowering therapy corrects endothelial cell dysfunction in a short time but does not affect hypercoagulable state even after long-term use in hyperlipidemic patients"Blood Coagul. Fibrinol.. 10(5). 269-276 (1999)

Kazuomi Kario：“降脂疗法可以在短时间内纠正内皮细胞功能障碍，但即使在高脂血症患者长期使用后也不影响高凝状态”凝血。

Xiang-An Li: "Cloning and characterization of a novel human gene encoding a zinc finger protein with 25 fingers"Biochim. Biophys. Acta. 1489. 405-412 (1999)

李翔安：“编码具有 25 个手指的锌指蛋白的新型人类基因的克隆和表征”Biochim。

Toshiyuki Sakata: "Prevalence of protein C deficiency in patien with cardiovascular problems in Japan"Thromb. Haemost.. 81(3). 466-467 (1999)

Toshiyuki Sakata：“日本心血管疾病患者中蛋白质 C 缺乏症的患病率”血栓。