新しい血液凝固制御因子ADAMTS-13の構造と機能に関する研究

新型凝血调节剂ADAMTS-13的结构与功能研究

• 批准号: 15770093
• 负责人: 小亀 浩市
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: National Cardiovascular Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770093/
• 关键词: 血液; 凝固因子; 血小板; ADAMTS-13; フォンビルブランド因子; 血栓性血小板減少性紫斑病; 蛋白質分解; 酵素

ADAMTS-13は、フォンビルブランド因子(VWF)を切断することでVWFの血小板凝集能を調節する酵素である。ADAMTS-13活性の欠損は血栓性血小板減少性紫斑病(TTP)を引き起こす。本研究は、ADAMTS-13の構造と機能を解析し、臨床的に役立つ知見を得ることを目的とした。【ADAMTS-13活性測定法の開発】初年度に、ADAMTS-13の特異的基質として機能する最短ペプチドを同定し、これを利用した組換えタンパク質による活性測定法を開発した。今年度は、蛍光基で修飾した化学合成ペプチド基質を開発し、より簡便に測定できる系を確立した。【ADAMTS-13活性の分布調査】開発した蛍光測定法を用い、種々の患者および地域一般住民の血漿ADAMTS-13活性を測定した。従来の報告と同様、TTP患者ではADAMTS-13活性が著減していたが、類似症状を示す溶血性尿毒症症候群患者では正常範囲内の活性が検出された。また、ADAMTS13活性は加齢と共に低下すること、男性より女性の方が有意に高いことが明らかになった。【VWF切断部位認識抗体の作製】初年度、ADAMTS-13で切断されたVWFのC末端断片のN末端を特異的に認識するモノクローナル抗体の作製を試みたが、目的のクローンは得られなかった。そこで今年度は、N末端断片のC末端に対する抗体の作製を試みたが、やはり成功しなかった。本計画を成功させるには、より工夫した戦略が必要なのかもしれない。【ADAMTS-13ノックアウトマウスの解析】初年度から作製し始めていたADAMTS-13ノックアウトマウスが完成した。血漿のADAMTS-13活性は予想通り検出限界未満であり、超高分子量VWFマルチマーの存在も確認できた。しかし、少なくとも通常飼育下ではTTP様の症状を示さなかった。このことは、ヒトとマウスにおいてADAMTS-13への依存度が異なる可能性、あるいは、ヒトにおいてもTTP発症にADAMTS-13以外の要因が関与している可能性を示唆している。本研究によって、今後のADAMTS-13研究の発展に結びつく重要な成果が得られたものと考えられる。

ADAMTS-13 is an enzyme that regulates platelet aggregation by blocking the activation of VWF. Deficiency in ADAMTS-13 activity leads to thrombotic thrombocytopenia purpura (TTP). This study aims to analyze the structure and function of ADAMTS-13 and to understand its clinical application. [Development of ADAMTS-13 Activity Assay] In the early years, the shortest selection criteria for ADAMTS-13's specific substrate and functional domain were determined, and an activity assay was developed that utilizes these components to replace the substrate. This year, the chemical synthesis of photo-based materials was developed and the system was established. [Distribution of ADAMTS-13 Activity] Development of a new method for measuring ADAMTS-13 activity in plasma from patients and general population Similarly, ADAMTS-13 activity has been reported to decrease in patients with TTP and to decrease in patients with hemolytic uremic syndrome with similar symptoms. ADAMTS13 activity is higher in males than in females. In the early years, ADAMTS-13 was used to cut off the N-terminal fragment of VWF. This year, the N-terminal fragment and the C-terminal fragment of the antibody were successfully produced. This project is successful, and the time is necessary. ADAMTS-13 ADAMTS-13 activity in plasma was determined by the detection limit, and the existence of ultra-high molecular weight VWF was confirmed. The symptoms of TTP are usually indicated under breeding conditions. The dependence of ADAMTS-13 on TTP is different from that on ADAMTS-13. This study is aimed at the development of future ADAMTS-13 research.

项目成果

Differential contributions of ATF6 and XBP1 in activating endoplasmic reticulum stress-responsive cis-acting elements ERSE, UPRE and ERSE-II.

ATF6 和 XBP1 在激活内质网应激反应顺式作用元件 ERSE、UPRE 和 ERSE-II 中的不同贡献。

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Biochem. 136(3)
• 作者: Tomohiko Okuda;Sic L.Chan;Fumiaki Banno;Keisuke Yamamoto
• 通讯作者: Keisuke Yamamoto

フォンビルブランド因子切断酵素の特異的基質および活性測定法

冯维勒布兰德因子裂解酶的特异性底物和活性测定

• 发表时间: 2002

Identification of strain-specific variants of mouse Adamtsl3 gene encoding von Willebrand factor-cleaving protease.

编码冯维勒布兰德因子裂解蛋白酶的小鼠 Adamtsl3 基因的品系特异性变体的鉴定。

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Biol.Chem. 279(29)
• 作者: Tomohiko Okuda;Sic L.Chan;Fumiaki Banno
• 通讯作者: Fumiaki Banno

Identification of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD)-inducible and -suppressive genes in the rat.

鉴定大鼠中 2,3,7,8-四氯二苯并-对二恶英 (TCDD) 诱导和抑制基因。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Endocr J. 51(6)
• 作者: Tomohiko Okuda;Sic L.Chan;Fumiaki Banno;Keisuke Yamamoto;Tetsuya Mizutani
• 通讯作者: Tetsuya Mizutani

Koichi Kokame: "Genetic defects leading to hereditary thrombotic thrombocytopenic purpura."Semin.Hematol.. 41(1). 34-40 (2004)

Koichi Kokame：“遗传缺陷导致遗传性血栓性血小板减少性紫癜。”Semin.Hematol.. 41(1)。