新規アンチセンス核酸を用いるエイズウイルス遺伝子の発現制御

使用新型反义核酸控制艾滋病病毒基因表达

• 批准号: 11161212
• 负责人: 和田 猛
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11161212/
• 关键词: アンチセンス核酸; DNAアナログ; 保護基; H-ホスホネートDNA; エイズウイルス; mRNA

現在、エイズウイルス遺伝子を標的としたアンチセンス法はある種の限界に到達しており、飛躍的な新しいアイディアの出現が待たれているのが現状である。我々はごく最近、アミノ基およびリン酸基に保護基を必要としない全く新しい核酸分子構築法を開発した。従来の核酸合成法では核酸のアミノ基およびリン酸基に塩基性条件下除去される保護基が用いられているために保護基の除去条件下で分解してしまうようなDNAの誘導体を得ることができなかった。我々の開発した新しい方法を用いればこれらの核酸誘導体が効率良く合成できるはずである。さらに、この新しい核酸合成法の特徴はリン酸よりも酸化度の低いH-ホスホネートDNA中間体を経由するために、この中間体からインターヌクレオチドを修飾した種々のアンチセンス核酸への変換が可能である。そこで、本研究では遊離のアミノ基をもつH-ホスホネートDNAを合成し、これを種々の新規アンチセンス核酸に変換する試みをおこなった。まず、すべての新規アンチセンス核酸合成における共通の合成中間体であり、構造的に最も単純なP-H結合をもつH-ホスホネートDNAの合成を検討した。オリゴヌクレオチドの3'および5'末端にヒドロキシヘキシル基を導入することによってインターヌクレオチド結合を安定化することができることを見出し、世界で初めてH-ホスホネートDNAを単離することに成功した。つぎに、このH-ホスホネートDNAを種々の新規アンチセンス核酸に変換する反応について検討したところ、P-NH_2結合をもつホスホロアミデートDNA、P-OCH_3結合をもつメチルホスフェートDNA、P-CH_2OH結合をもつヒドロキシメチルホスホネートDNAを合成することができた。一方、HIV-1 nef-mRNAの塩基配列を種々検索し、二次構造と変異頻度を考慮してアンチセンス核酸の標的部位を決定した。この標的部位に対する種々の新規アンチセンス核酸を合成し、nef-タンパク質の発現制御に関する基礎的な実験をおこなったが、顕著なアンチセンス活性は認められなかった。現在、種々の標的部位に対する鎖長の異なるアンチセンス核酸を用いて、nef-タンパク質の発現制御を試みている。

Now, エ イ ズ ウ イ ル ス posthumous son 伝 を mark と し た ア ン チ セ ン ス method は あ る kind の limit に reach し て お り, leap な new し い ア イ デ ィ ア の appear が stay た れ て い る の が status quo で あ る. I 々 は ご く recently, ア ミ ノ base お よ び リ ン acid radical に protection base を necessary と し な い く all new し い nucleic acid molecular building を open 発 し た. 従 to の nucleic acid synthesis で は nucleic acid の ア ミ ノ base お よ び リ ン acid radical に salt basic conditions to remove さ れ る with base が い ら れ て い る た め に protection under the condition of base の remove で decomposition し て し ま う よ う な DNA の inductor を have る こ と が で き な か っ た. I 々 の open 発 し た new し を use い い method れ ば こ れ ら の nucleic acid induced body が sharper rate good く synthetic で き る は ず で あ る. さ ら に, こ の new し い nucleic acid synthesis の, 徴 は リ ン acid よ り も low degree of acidification の い H - ホ ス ホ ネ ー ト DNA intermediates を 経 by す る た め に, こ の intermediates か ら イ ン タ ー ヌ ク レ オ チ ド を modified し た kind 々 の ア ン チ セ ン ス nucleic acid へ の variations in が may で あ る. そ こ で, this study で は free の ア ミ ノ base を も つ H - ホ ス ホ ネ ー ト を DNA synthesis し, こ れ を kind 々 の new rules ア ン チ セ ン ス nucleic acid に variations in す る try み を お こ な っ た. ま ず, す べ て の new rules ア ン チ セ ン ス nucleic acid synthesis に お け る common の intermediates で あ り, tectonic に most も 単 pure な P - H combining を も つ H - ホ ス ホ ネ ー ト の DNA synthesis を beg し 検 た. オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド の 3 'お よ び 5' end に ヒ ド ロ キ シ ヘ キ シ ル base を import す る こ と に よ っ て イ ン タ ー ヌ ク レ オ チ ド combining を stabilization す る こ と が で き る こ と を see し, the early で め て H - ホ ス ホ ネ ー ト DNA を 単 from す る こ と に successful し た. つ ぎ に, こ の H - ホ ス ホ ネ ー ト を kind of DNA 々 の new rules ア ン チ セ ン ス nucleic acid に variations in す る anti 応 に つ い て beg し 検 た と こ ろ, P - NH_2 combining を も つ ホ ス ホ ロ ア ミ デ ー ト DNA, as well as the combination of P - OCH_3 を も つ メ チ ル ホ ス フ ェ ー ト DNA, as well as the combination of P - CH_2OH を も つ ヒ ド ロ キ シ メ チ ル Youdaoplaceholder0 ホスホネ トDNAを synthesis する た とがで た た. Nef side, HIV - 1 - mRNA の salt base with column を kind 々 検 suo し, secondary tectonic と - different frequency を consider し て ア ン チ セ ン ス の nucleic acid target site を decided し た. こ の mark parts に す seaborne る kind 々 の new rules ア ン チ セ ン ス し を nucleic acid synthesis, nef タ ン パ ク qualitative の 発 now suppression に masato す る based な be 験 を お こ な っ た が, 顕 な ア ン チ セ ン は ス activity recognition め ら れ な か っ た. Now, kind of 々 の mark parts に す seaborne る lock long の different な る ア ン チ セ ン ス を nucleic acids with い て, nef タ ン パ ク qualitative の 発 suppression now try を み て い る.

项目成果

Seio, K., Wada, T., Sekine, M.: "Synthesis and Properties of Oligothymidylates Incorporating an Artificial Bend Motif"Helvetica Chimica Acta. 83・1. 162-180 (2000)

Seio, K.、Wada, T.、Sekine, M.：“结合人工弯曲基序的寡核苷酸的合成和性质”Helvetica Chimica Acta 83・1（2000）。

Wada, T., Sato, Y., Kawahara, S., Sekine, M.: "A New H-Phosphonate Approach Using N-Unprotected Monomers and Phosphonium Condensing Reagents"Nucleosides Nucleotides. 18・6-7. 1225-1226 (1999)

Wada, T.、Sato, Y.、Kawahara, S.、Sekine, M.：“使用 N-未保护单体和鏻缩合试剂的新 H-磷酸盐方法”核苷 18・6-7。 1999）

Moriguchi, T.; Asai, Wada, T.; Sekine, M.: "Synthesis of nucleotide antibiotics having N-acyl phoshoramidate linkages"Nucleic Acids Symposium Series. 42. 15-16 (1999)

森口，T.；

Wada, T., Honda, F., Sato, Y., Sekine, M.: "First Synthesis of H-phosphonate Oligonucleotides Bearing N-Unmodified Bases"Tetrahedron Letters. 40・5. 915-918 (1999)

Wada, T.、Honda, F.、Sato, Y.、Sekine, M.：“带有 N-未修饰碱基的 H-膦酸寡核苷酸的首次合成”四面体快报 40・5（1999）。

Kawahara, S., Wada, T., et al: "Ab Initio and Density Functional Studies of Substituent Effects on an A-U Base Pair on the Stability of Hydrogen Bonding"J. Phys. Chem. A. 103・42. 8516-8523 (1999)

Kawahara, S., Wada, T., 等：“A-U 碱基对对氢键稳定性的从头计算和密度泛函研究”J. Phys. A. 8516-8523。 (1999)