アミノ基・リン酸基無保護法による新規アンチセンス核酸の分子構築

使用氨基/磷酸基未保护方法构建新型反义核酸

• 批准号: 08878084
• 负责人: 和田 猛
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878084/
• 关键词: アンチセンス核酸; DNAアナログ; 保護基; H-ホスホネートDNA; 水酸基選択的ホスホリル化; ^<31>P-NMR

核酸には水酸基、アミノ基、リン酸基といった種々の官能基が存在するために、化学合成に際してこれらの官能基に適当な保護基を導入しておく必要がある。特に、従来の核酸合成法ではアミノ基とリン酸基には塩基性条件下除去される保護基(ベンゾイル基やシアノエチル基など)が用いられているために、保護基の除去条件、すなわち塩基性条件下で分解してしまうようなDNAアナログ(アンチセンス核酸)は合成できなかった。本研究では、核酸のアミノ基およびリン酸基に保護基を導入することなく核酸分子を構築する新しい方法を開発することにより、これまで合成が不可能とされてきた種々の新規DNAアナログ(アンチセンス核酸)を合成することを目的とする。まず、アミノ基とリン酸基を無保護で核酸分子を構築するために、核酸塩基に対する種々の活性リン化合物の反応を^<31>P-NMRを用いて調べたところ、アミノ基に副反応の起こらない水酸基選択的なホスホリル化反応を見い出すことができた。この方法はリン酸よりも酸化度の低いホスホン酸誘導体を出発物質として用いるために、インターヌクレオチドのリン原子に保護基を導入する必要がない。さらに、この方法で得られるH-ホスホネートDNAは種々のDNAアナログ(アンチセンス核酸)合成における有用な合成中間体であると同時にそれ自身が最も単純な構造をもつ新規アンチセンス核酸である。このH-ホスホネートDNAは、従来の核酸合成法では塩基部の保護基を除去するアンモニア処理で瞬時に加水分解されるためにこれまで単離することができないと考えられてきた。本研究では、塩基部無保護の核酸合成法を用いて4-15量体のH-ホスホネートDNAを初めて単離することに成功した。

Nucleic acid に は water acid base, ア ミ ノ base, リ ン acid radical と い っ た kind 々 の functionality が exist す る た め に, chemical synthesis に interstate し て こ れ ら の functionality に な appropriate protection base を import し て お く necessary が あ る. に, 従 to の nucleic acid synthesis, で は ア ミ ノ base と リ ン acid radical に は salt basic conditions to remove さ れ る protection base (ベ ン ゾ イ ル base や シ ア ノ エ チ ル base な ど) が with い ら れ て い る た め に, protect の remove conditions, す な わ ち salt decomposition of basic conditions で し て し ま う よ う な DNA ア ナ ロ グ (ア ン チ セ ン ス nucleic acid) は synthetic で き Youdaoplaceholder0 った. This study で は, nucleic acid の ア ミ ノ base お よ び リ ン acid radical に protection base を import す る こ と な く nucleic acids を build す る new し い method を open 発 す る こ と に よ り, こ れ ま で synthetic が impossible と さ れ て き た kind 々 の new rules on DNA ア ナ ロ グ (ア ン チ セ ン ス nucleic acid) を synthetic す る こ と を purpose と す る. ま ず, ア ミ ノ base と リ ン acid base を unprotected で nucleic acids を build す る た め に, nucleic acid salt base に す seaborne る kind 々 の active リ の ン compounds against 応 を ^ < 31 > P - NMR を with い て adjustable べ た と こ ろ, ア ミ ノ base に anti 応 の up こ ら な い water acid base sentaku な ホ ス ホ リ ル turn against 応 を see い out す こ と が で き た. こ の way は リ ン acid よ り も low degree of acidification の い ホ ス ホ ン acid induced body を と 発 substance し て in い る た め に, イ ン タ ー ヌ ク レ オ チ ド の リ ン atomic に protection base を import す る necessary が な い. で さ ら に, こ の method ら れ る H - ホ ス ホ ネ ー ト は kind of DNA 々 の DNA ア ナ ロ グ (ア ン チ セ ン ス nucleic acid) synthesis に お け る な useful intermediates で あ る と simultaneously に そ が れ itself most も 単 pure な constructs を も つ new rules ア ン チ セ ン ス nucleic acid で あ る. こ の H - ホ ス ホ ネ ー ト は, 従 to の nucleic acid DNA synthesis で は salt base の protection base を remove す る ア ン モ ニ ア 処 Richard で instantaneous に hydrolytic decomposition さ れ る た め に こ れ ま で 単 from す る こ と が で き な い と exam え ら れ て き た. This study で は, salt base unprotected の nucleic acid synthesis を with い て の H - 4-15 body ホ ス ホ ネ ー ト early DNA を め て 単 from す る こ と に successful し た.

项目成果

K.Seio,T.Wada,k.Sakamoto S.Yokoyama,M.Sekine: "Chemical Synthesis and Conformational Properties of a New Cyclouridylic acid Having an Ethylene Bridge between the Uracil 5-Position and 5'-Phosphate Group" Journal of Organic Chemistry. 61・4. 1500-1504 (1996

K. Seio、T. Wada、k. Sakamoto S. Yokoyama、M. Sekine：“尿嘧啶 5 位和 5-磷酸基团之间具有乙烯桥的新型环尿苷酸的化学合成和构象性质”有机杂志化学 61・4。1500-1504（1996）

M.Sekine,H.Tsuruoka,S.Iimura,H.Kusuoku,T.Wada: "Studies on Steric and Electronic Control of 2'-3' Phosphoryl Migration in 2'-Phosphorylated Oligouridylates" Journal of Organic Chemistry. 61・12. 4087-4100 (1996)

M.Sekine、H.Tsuruoka、S.Iimura、H.Kusuoku、T.Wada：“2-磷酸化寡尿苷酸中 2-3 磷酰基迁移的空间和电子控制研究”有机化学杂志 61・12。 .4087-4100 (1996)