ボラノホスフェートDNAを用いるHIV-nefタンパク質の発現制御

使用硼磷酸盐 DNA 调节 HIV-nef 蛋白表达

• 批准号: 13015205
• 负责人: 和田 猛
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13015205/
• 关键词: ボラノホスフェートDNA; アンチセンス核酸; エイズ; HIV; Nefタンパク質; mRNA

現在、エイズウイルス遺伝子を標的としたアンチセンス法はある種の限界に到達しており、飛躍的を新しいアイディアの出現が待たれているのが現状である。そこで、本研究では全く新しいアンチセンス核酸であるボラノホスフェートDNAに着目した。ボラノホスフェートDNAは天然型DNAの非架橋酸素原子の一つをボランで置換した構造を持ち、酸や塩基に対して極めて安定である。また、天然型DMより脂溶性が高く、細胞膜透過性に優れ、ヌクレアーゼによる分解に耐性を示す。さらに、ボラノホスフェートDNAは、相補的な塩基配列を持つRNAとが形成する二重鎖がRNase Hの基質となることなどから、アンチセンス核酸として有望である。しかし、副反応などの問題から、これまでにA, G, C, T4種類の核酸塩基を有するオリゴヌクレオチドボラノホスフェートの合成例は無い。このような状況から、ボラノホスフェートDNAの新規合成法を確立することを目標として研究を開始した。従来のボラノホスフェートDNA合成法は、ホスホロアミダイト法やH-ホスホネート法を用いて3価のオリゴヌクレオチド鎖を構築し、合成の最後のステップでインターヌクレオチドのボラノ化を行うために、核酸塩基部がボラノ化試薬と反応してしまう。従って、この副反応の比較的起こりにくいチミジル酸誘導体のみが合成されている。申請者は、あらかじめリン原子にボランが導入された新規ボラノホスホリル化剤を開発し、これを用いてヌクレオシドをボラノホスホリル化することにより、従来法における核酸塩基に対するボラノ化剤の副反応の問題を本質的に解決した。本年度は新規合成法における核酸塩基の保護基の選択、縮合反応系の開発を行い、4種類の2量体TT, CT, GT, ATの合成に世界ではじめて成功した。現在,この方法の固相合成への応用を検討しており,今後HIV-nef mRNAに対するボラノホスフェート型アンチセンス核酸の合成を行い,実際のアンチセンス効果を評価する予定である。

Now, エ イ ズ ウ イ ル ス posthumous son 伝 を mark と し た ア ン チ セ ン ス method は あ る kind の limit に reach し て お り, leap を new し い ア イ デ ィ ア の appear が stay た れ て い る の が status quo で あ る. そ こ で, this study で は く all new し い ア ン チ セ ン ス nucleic acid で あ る ボ ラ ノ ホ ス フ ェ ー ト に DNA with mesh し た. ボ ラ ノ ホ ス フ ェ ー ト DNA は type natural DNA の bridge acid element atoms の a つ を ボ ラ ン で replacement し た や tectonic を hold ち, acid salt base に し seaborne て extremely め て settle で あ る. ま た, natural type DM よ り fat-soluble が く, cell membrane permeability に れ, ヌ ク レ ア ー ゼ に よ る decomposition に patience を す. さ ら に, ボ ラ ノ ホ ス フ ェ ー ト は, phase of DNA な salt base with column を hold つ RNA と が form す る double lock が RNase H の matrix と な る こ と な ど か ら, ア ン チ セ ン ス nucleic acid と し て could で あ る. し か し, anti 応 な ど の problem か ら, こ れ ま で に A, G, C, types of T4 の nucleic acid salt base を have す る オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド ボ ラ ノ ホ ス フ ェ ー ト の は no い synthetic example. こ の よ う な condition か ら, ボ ラ ノ ホ ス フ ェ ー ト DNA の new rules synthesis を establish す る こ と を target と し て research を start し た. 従 to の ボ ラ ノ ホ ス フ ェ ー ト DNA synthesis は, ホ ス ホ ロ ア ミ ダ イ ト method や H - ホ ス ホ ネ ー を ト method with い て 3 価 の オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を build し lock, synthetic の finally の ス テ ッ プ で イ ン タ ー ヌ ク レ オ チ ド の ボ ラ ノ change line を う た め に, nucleic acid salt base が ボ ラ ノ turn try 薬 と anti 応 し て し ま う. The 従って and <s:1> <s:1> side reactions 応 <e:1> are compared with the <s:1> にく にく チ チ ジ ジ ジ acid-inducer みが みが synthesis されて る る る る. Applicants は, あ ら か じ め リ ン atomic に ボ ラ ン が import さ れ た new rules ボ ラ ノ ホ ス ホ リ ル the tonic を open 発 し, こ れ を with い て ヌ ク レ オ シ ド を ボ ラ ノ ホ ス ホ リ ル change す る こ と に よ り, 従 to に お け る nucleic acid salt base に す seaborne る ボ ラ ノ the tonic の anti 応 の problems essentially を に し た. New rules this year は synthesis に お け る nucleic acid salt base の protection base の sentaku, condensation anti 応 is の 発 を い, 4 species の 2 quantity body TT, CT, GT, synthetic に AT の world で は じ め て successful し た. Now, こ の way の solid-phase synthesis へ の 応 with を beg し 検 て お り, future HIV - nef mRNA に す seaborne る ボ ラ ノ ホ ス フ ェ ー ト type ア ン チ セ ン を line い ス の nucleic acid synthesis, the event be の ア ン チ セ ン ス unseen fruit を review 価 す る designated で あ る.

项目成果

Wada, T., Mochizuki, A., Higashiya, S., Tsuruoka, H., Kawahara, S., Ishikawa, M., Sekine, M.: "Synthesis and properties of 2-azidodeoxyadenosine and its incorporation into oligodeox ynucleotides"Tetrahedron Letters. 42・52. 9215-9219 (2001)

Wada, T.、Mochizuki, A.、Higashiya, S.、Tsuruoka, H.、Kawahara, S.、Ishikawa, M.、Sekine, M.：“2-叠氮脱氧腺苷的合成和特性及其掺入寡脱氧核苷酸”四面体信件。42・52。9215-9219（2001）

Kadokura, M., Wada, T., Seio, K., Moriguchi, T., Huber, J., Luhrmann, R., Sekine, M.: "Solid-phase synthesis of a 5'-terminal TMG-capped trinucleotide block of U1 SnRNA"Tetrahedron Letters. 42・50. 8853-8856 (2001)

Kadokura, M.、Wada, T.、Seio, K.、Moriguchi, T.、Huber, J.、Luhrmann, R.、Sekine, M.：“5-末端 TMG 加帽三核苷酸的固相合成U1 SnRNA的块“四面体字母。42・50。8853-8856（2001）

Wada, T., Ohkubo, A., Mochizuki, A., Sekine, M.: "2-(Azidomethyl)benzoyl as a new protecting group in nucleosides"Tetrahedron Letters. 42・6. 1069-1072 (2001)

和田 T.、大久保 A.、望月 A.、关根 M.：“2-(叠氮甲基)苯甲酰基作为核苷中的新保护基”Tetrahedron Letters 42・6 (2001)。

Wada, T., Kobori, A., Kawahara, S., Sekine, M.: "Synthesis and hybridization ability of oligodeoxyribonucleotides incorporating N-acyldeox ycytidine derivatives"Eur. J. Org. Chem.. 4583-4593 (2001)

Wada，T.，Kobori，A.，Kawahara，S.，Sekine，M.：“掺入N-酰基脱氧胞苷衍生物的寡脱氧核糖核苷酸的合成和杂交能力”Eur。

Wada, T., Tsuneyama, T., Saigo, K: "Synthesis of a new type of artificial nucleic acid derived from optically active serine"Nucleic Acids Res., Suppl.. 1. 187-188 (2001)

Wada, T.、Tsuneyama, T.、Saigo, K：“从光学活性丝氨酸衍生的新型人工核酸的合成”Nucleic Acids Res.，Suppl.. 1. 187-188 (2001)