代謝拮抗剤5-FUによるDNA障害の機構とミスマッチ修復能の関与-マイクロサテライト不安定性は5-FU感受性予知因子となりうるか-

抗代谢物 5-FU 引起的 DNA 损伤机制和错配修复能力的参与 - 微卫星不稳定性可以作为 5-FU 敏感性的预测因子吗？

• 批准号: 11877200
• 负责人: 前原 喜彦
• 金额: $ 0.32万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877200/
• 关键词: ミスマッチ修復; マイクロサテライト不安定性; 5-FU; DNA障害

本研究では、5-FUの作用機序におけるDNA障害機構とミスマッチ修復の意義を解明し、マイクロサテライト不安定性解析によるミスマッチ修復能の検索が、5-FU感受性の予知因子となりうるのか決定する基礎データの集積を目的とする。ミスマッチ修復能の判明している種々の大腸癌細胞株を用いて、5-FU感受性とミスマッチ修復能との関連について解析した。この際、5-FUによる細胞のDNA障害に対しG1/SチェックポイントでのDNA修復かアポトーシスによる細胞死を選択するp53の発現や、5-FU感受性の主要酵素であるチミジル酸合成酵素(TS)の活性や発現、5-FUによるRNA障害や細胞周期の変化など詳細な検討を加え5-FU感受性におけるミスマッチ修復能の意義を考察した。その結果、p53は細胞周期の変化には関与しているが直接感受性を規定するものではないこと、TSがほぼ抑制されている状態では、ミスマッチ修復異常細胞はミスマッチ修復正常細胞より5-FU感受性が低いことが明らかとなった。(E.Tokunaga,et al.Eur J Cancer 36;1998-2006,2000)。さらに我々はミスマッチ修復遺伝子MSH2のノックアウトマウス由来の胚繊維芽細胞を用いて5-FU感受性を解析した。MSH2欠損細胞株は正常胚繊維芽細胞株より有意に5-FU感受性が低いことがわかった。今後はこれらのミスマッチ修復遺伝子欠損細胞にミスマッチ修復遺伝子を導入し、ミスマッチ修復能を回復した細胞の5-FU感受性の変化も解析する予定である。更に、他のミスマッチ修復遺伝子ノックアウトマウス由来の細胞を用いて同様の検討を加える予定である。臨床検体での解析系では、ミスマッチ修復異常の評価のためのより客観的なマイクロサテライト不安定性解析法を開発しており(S.Oda,et al.Nucleic Acids Res 25;3415-3420,1997)臨床解析症例も既に1000例を超えた。今後はマイクロサテライト不安定性により評価した各症例のミスマッチ修復異常と抗癌剤感受性試験での5-FU感受性、更に臨床効果との相関を検討していきたいと考える。

The purpose of this study is to clarify the mechanism of action of 5-FU, the significance of DNA damage mechanism and repair, the analysis of instability of 5-FU, the detection of DNA damage mechanism and the determination of 5-FU sensitivity. The identification of 5-FU repair ability and its correlation with 5-FU sensitivity in colorectal cancer cell lines At the same time, the development of p53 in DNA damage of 5-FU cells, the activity of 5-FU-sensitive acid synthase (TS), the development of 5-FU-sensitive RNA damage cell cycle, and the significance of 5-FU-sensitive DNA repair were investigated. Results: p53 cell cycle changes, direct sensitivity changes, TS changes, abnormal cell changes, 5-FU changes (E.Tokunaga,et al.Eur J Cancer 36;1998-2006,2000)。The 5-FU sensitivity of embryonic germ cells derived from MSH2 was analyzed. MSH2 defective cell line is a normal embryo cell line with low sensitivity to 5-FU. In the future, the analysis of 5-FU sensitivity of damaged cells will be determined by introducing and repairing genes into damaged cells. In addition, he is the same as the repair gene, the origin of the cell, the use of the same type of discussion, to increase the predetermined number of The analysis of clinical symptoms was carried out in more than 1000 cases (S.Oda,et al. Nucleic Acids Res 25;3415- 3420, 1997). In the future, we will evaluate the sensitivity of 5-FU in various cases, and discuss the correlation between the sensitivity of 5-FU and clinical effects.

项目成果

E.Tokunaga,S Oda,Fukushima M,Maehara Y,Sugimachi K.: "Differential growth inhibition by 5-fluorouracil in human colorectal carcinoma cell lines."Eur J Cancer. 36. 1998-2006 (2000)

E.Tokunaga，S Oda，Fukushima M，Maehara Y，Sugimachi K.：“5-氟尿嘧啶对人结直肠癌细胞系的差异生长抑制。”Eur J Cancer。

沖 英次 他: "Mutated gene-sprcific phenotype of dinucleotide repeat instability in human colorectal carcinoma cell lines deficient in DNA mismatch repair."Oncogene. 18. 2143-2147 (1999)

Eiji Oki 等人：“DNA 错配修复缺陷的人结直肠癌细胞系中二核苷酸重复不稳定性的突变基因特异性表型”。Oncogene。18. 2143-2147 (1999)

徳永えり子 他: "Frequency of microsatellite instability in breast cancer determined by High Resolution Fluorescent Microsatellite Analysis."Oncology. (in press).

Eriko Tokunaga 等人：“通过高分辨率荧光微卫星分析确定乳腺癌中微卫星不稳定性的频率”。