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STATによるTh1細胞分化の分子機構-STAT4標的遺伝子の同定

STAT诱导Th1细胞分化的分子机制-STAT4靶基因的鉴定

基本信息

批准号：
12051214
负责人：
宮坂信之
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12051214/
关键词：
インターロイキン-12 転写因子 STAT4

项目摘要

我々は、インターロイキン(IL)-12、受容体、JAKキナーゼ、転写因子STAT4のシグナル伝達経路を明らかにしてきたが、その下流で制御される標的遺伝子については不明のままである。IL-12は、細胞傷害性の作用を増強に関わるのことから、パーフォリン(Pf)遺伝子に注目し、そのプロモーター領域について検討した。また、恒常的な活性化を示すSTAT4遺伝子のコンストラクトを構築した。ヒトNK細胞株をIL-12で刺激し、ノザーンブロットを行なうと、Pf遺伝子の発現の増強が認められた。Pf遺伝子のプロモーター領域には、STAT結合配列(TTCNNNGAA)に類似した配列が数ヶ所認められ、STAT結合配列が二つ並んだ部分(-1089から-1081と-1063から-1055)を用いてゲルシフトアッセイを行なったところ、STAT1,3,4,5の結合が認められた。このSTAT結合配列に変異を加えると、ゲルシフトアッセイで結合が認められなくなった。Pf遺伝子のプロモーター領域を用いて、ルシフェラーゼアッセイで解析すると、転写活性が認められた。二つ並んだSTAT結合配列に点変異を加えると、片方に変異を加えるだけで転写活性が著しく低下した。STAT4の標的遺伝子のひとつとして、Pf遺伝子があり、Pf遺伝子の発現の制御には、プロモーター領域にある二つの並んだSTAT結合配列が重要である。サイトカイン、JAKにより活性化されたSTATが二量体や四量体になって、並んだSTAT結合配列に結合する機序が考えられる。STAT4遺伝子とエストロゲン受容体のキメラ分子を作成し、エストロゲンアナログで刺激すると、STAT4の活性化が認められた。エストロゲン存在下で、活性型STAT4として機能することがわかった。STAT4の標的遺伝子をスクリーニングする上で、STAT4-エストロゲン受容体キメラ分子を活性型として遺伝子導入し、発現パターンの変化を検討する方法が有用であると考えられる。

I, I, IL-12 has been shown to enhance the cytotoxic effects of IL-12 on human cells. The constant activation of STAT4 gene is the key to the construction of STAT4 gene. NK cell line IL-12 was stimulated and the expression of Pf gene was enhanced. Pf gene and STAT binding array (TTCNNNGAA) are similar to the number of pairs recognized by STAT binding array (-1089-1081-1063-1055), and the number of pairs recognized by STAT1,3,4,5. The combination of STAT is different. Pf gene expression in the field of application, the analysis of the gene expression, the activity of the gene expression 2. The combination of STAT and the difference between the dots is increased, and the difference between the slices is increased. STAT4's target gene, Pf gene, Pf gene's control, Pf gene's control domain, Pf gene's control, Pf gene's control domain, Pf gene's control, Pf gene's control domain, Pf gene's control domain, Pf gene's control, Pf gene's control domain, Pf gene's control domain, Pf gene's control The binding mechanism of STAT, JAK, and STAT is examined. STAT4 is activated by the activation of the STAT4 receptor. In the presence of active STAT4, the function of STAT4 can be changed. STAT4 target gene expression is useful in the study of STAT4-target receptor molecule activation, gene introduction, and gene transformation.