遺伝子導入滑膜細胞のシグナル伝達機構の解析―DNAアレイ法との比較検討

基因转移滑膜细胞信号转导机制分析——与DNA阵列法的对比研究

• 批准号: 13877073
• 负责人: 宮坂 信之
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13877073/
• 关键词: 慢性関節リウマチ; サイクリン依存性キナーゼ阻害因子; 細胞周期; シグナル伝達

サイクリン依存性キナーゼインヒビター(CDKI)p16^<INK4a>もしくはp21^<Cipl>遺伝子導入による滑膜への細胞周期制御療法は、慢性関節リウマチ(RA)動物モデルの関節炎に著効し、滑膜組織での炎症性サイトカイン産生を抑制した。そこで、p21^<Cipl>による細胞周期制御療法の分子的基盤を明らかにするため、RA由来滑膜線維芽細胞(RSF)にp21^<Cipl>遺伝子を導入した時の種々の遺伝子発現の変化を解析した。そのために、先ず、RSFを培養し、p21^<Cipl>アデノウイルスもしくは挿入遺伝子のないアデノウイルスを感染させ、IL-1βとTNF-α刺激下ないし無刺激下において、DNAアレイにて遺伝子の発現変化を解析した。発現が変化した遺伝子の中から、RAの病態に関与すると考えられる遺伝子を選び、ノーザンブロット、ウェスタンブロット、ELISA法などで確認した。その結果、RSFにp21^<Cipl>遺伝子を導入すると、type I IL-1 recept or(IL-1R1), macrophage chemotactic protein(MCP)-1, cathepsin B, Kなどの分子の発現が減少していた。また、p21^<Cipl>を強制発現させたRSFにおいては、IL-1βとTNF-αとの刺激によるIL-6, IL-8, macrophage inflammatory protein(MIP)-3α, matrix metalloproteinase(MMP)-1, MMP-3の産生が抑制されていた。これらの分子の発現抑制には、activator protein(AP)-1の転写活性抑制やIL-1R1の発現低下が関与していると考えられた。従って、p21^<Cipl>細胞周期制御療法は、CDK活性抑制による滑膜増生の制御以外に、炎症や骨軟骨破壊に関与する分子の発現を減少させる作用を介して、関節炎治療効果を発揮すると考えられる。

Cell <INK4a><Cipl>cycle control therapy for synovial tissue induced by CDKI p16 and CDKI p21 gene transfer inhibits inflammation of synovial tissue due to arthritis in chronic joint disease (RA) animals. The <Cipl>molecular basis of cell cycle control therapy is clearly identified. The evolution of gene expression in RA derived synovial fibroblasts (RSF) is analyzed when p21 gene is introduced into RSF<Cipl>. The <Cipl>expression of IL-1β and TNF-α was analyzed in vitro and in vitro. The detection of RA and RA is confirmed by ELISA. As a result, the expression of <Cipl>type I IL-1 recept or(IL-1R1), macrophage chemotherapeutic protein(MCP)-1, cathepsin B, and K decreased after RSF p21 gene was introduced. The <Cipl>production of IL-6, IL-8, macrophage inflammatory protein(MIP)-3α, matrix metalloproteinase (MMP)-1, MMP-3 is inhibited by IL-1β, TNF-α and TNF-α. The inhibition of the expression of IL-1R1 and the inhibition of the activity of activator protein(AP)-1 are related to the decrease of the expression of IL-1R1. Cell <Cipl>cycle inhibition therapy mediated the inhibition of synovial proliferation by CDK activity, the reduction of molecular expression associated with inflammation and osteochondral breakdown, and the development of therapeutic effects for arthritis.

项目成果

Kohsaka H, Nasu K, Nonomura Y, Miyasaka N.: "Treatment of Arthritis with Cyclin-dependent Kinase Inhibitor Gene"Jpn J Clin Immunol. 23(6). 550-552 (2001)

Kohsaka H，Nasu K，Nonomura Y，Miyasaka N.：“用细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂基因治疗关节炎”Jpn J Clin Immunol。

Nonomura Y, Kohsaka H, Nasu K, Miyasaka N, et al.: "Suppression of arthritis by forced expression of cyclindependent kinase Inhibitor p21^<Cipl>gene into the joints"Int Immunol. 13(6). 723-731 (2001)

Nonomura Y、Kohsaka H、Nasu K、Miyasaka N 等人：“通过强制将细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 p21^<Cip1> 基因表达到关节中来抑制关节炎”Int Nutrition。