慢性関節リウマチの細胞回転制御遺伝子誘導療法の実用化に向けた検討

细胞更新控制基因诱导治疗类风湿性关节炎的实际应用研究

• 批准号: 12307012
• 负责人: 宮坂 信之
• 金额: $ 22.66万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12307012/
• 关键词: 慢性関節リウマチ; 細胞周期; 滑膜増殖; サイクリンキナーゼインヒビター; 遺伝子治療; 遺伝子療法; サイクリン依存性キナーゼインヒビター; サイトカイン

関節リウマチ(RA)における滑膜増殖を制御するために、細胞周期を負に制御するサイタリン依存性キナゼインヒビター(CDKI)に着目し、P161NK4a, P21Cip1をアデノウイルスベクターを用いて滑膜細胞に遺伝子導入すると、in vitroにおける滑膜増殖を抑制できるばかりか、これらの遺伝子を関節内に導入することにより、RAの動物モデルであるアジュバント関節炎及びコラーゲン関節炎の発症を阻止することができることを明らかにした(Nature Medicine 5 : 760,1999)。これらの動物モデルでは、滑膜増殖を阻止できるのみならず、炎症性サイトカイン発現も強力に抑制されることから、今回の研究ではこれら遺伝子導入による遺伝子プロファイルの変化をDNAマクロアレイを用いて解析を行った。具体的には、RA線維芽細胞にヒトp16INK4aを含む組換えアデノウイルスAxCAp16,または挿入遺伝子を持たないAsxIW1を50MOIで導入し、3日後にDNAアレイを用いて解析を行った。その結果、AxlW1導入細胞と比較してAxCAp16導入細胞では363の遺伝子発現が2倍以上になり、334の遺伝子発現慢性が1/2以下になった。発現が増強した遺伝子の中にはp16INK4a, cyclin D3, HSP27, HSP90など、一方、発現が低下した遺伝子にはMAPKAPK-2, MAPKK5, HGF, IL-18、oncostatin M, VCAM-1, MMP-1, 2, cathepsin B, K, Wn13, Fizzled6などがあった。以上より、P161NK4a遺伝子導入により、細胞周期関連遺伝子発現の増強とサイトカイン関連遺伝子、接着分子及びタンパク分解酵素関連遺伝子発現の減少などの種々の変化がみられたが、これらの遺伝子変化がp161NK4aを用いた遺伝子治療の有効性に関与していることが考えられる。今後、アデノウイルスベクターを用いた遺伝子療法の実用化にあたっては、アデノウイルスのarthritogenicityを減少させ、感染効率を向上させるなどの工夫が必要と思われ、現在検討中である。

Masato section リ ウ マ チ (RA) に お け る synovial rights colonization を suppression す る た め に, cell cycle を negative に suppression す る サ イ タ リ ン dependency キ ナ ゼ イ ン ヒ ビ タ ー (CDKI) に し, P161NK4a, P21Cip1をアデノウ スベ スベ スベ タ タ を を were introduced into すると and in with に て synovial cell に progeny 伝 Vitro に お け る synovial rights colonization を inhibit で き る ば か り か, こ れ ら の posthumous son 伝 を masato section within に import す る こ と に よ り, RA の animal モ デ ル で あ る ア ジ ュ バ ン ト masato section inflammation and び コ ラ ー ゲ ン masato section inflammation の 発 disease を stop す る こ と が で き る こ と を Ming ら か に し た (Nature Medicine 5: 760,1999. こ れ ら の animal モ デ ル で は, synovial rights colonization を stop で き る の み な ら ず, inflammatory サ イ ト カ イ ン 発 も now powerful に inhibit さ れ る こ と か ら, today back to の で は こ れ ら posthumous son 伝 import に よ る posthumous son 伝 プ ロ フ ァ イ ル の variations change を DNA マ ク ロ ア レ イ を with い analytical line を っ て た. Specific に は, RA line d bud cells に ヒ ト p16INK4a を containing む group in え ア デ ノ ウ イ ル ス AxCAp16, ま た は scions into legacy 伝 son を hold た な い AsxIW1 を 50 moi で import し, 3 future に DNA ア レ イ を with い analytical line を っ て た. そ の results, AxlW1 import cell と し て AxCAp16 import cell で は 363 の posthumous son 伝 発 が now more than 2 times に な り, 334 の heritage 伝 に 発 now chronic が 1/2 below な っ た. 発 が now raised strong し た heritage 伝 child の に は p16, cyclin D3, HSP27, HSP90 な ど, side, low 発 now が し た heritage 伝 son に は MAPKAPK - 2, MAPKK5, HGF, IL - 18, oncostatin M, VCAM 1, MMP-1, 2, cathepsin B, K, Wn13, Fizzled6な があった があった. Above よ り, P161NK4a but 伝 import に よ り, cell cycle masato even survived 伝 発 is の raised strong と サ イ ト カ イ ン masato even heritage 伝 child, then the molecular and び タ ン パ ク decomposition enzyme masato even heritage 伝 son 発 の now reduce な ど の kind 々 の variations change が み ら れ た が, こ れ ら の heritage 伝 sub - the が P161NK4a を with い た heritage 伝 son treatment の に unseen On て て る とが とが えられる. In the future, ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を with い た heritage 伝 の child therapy be used the に あ た っ て は, ア デ ノ ウ イ ル ス の arthritogenicity を reduce さ せ, infection rate of unseen を upward さ せ る な ど の time が と thought necessary わ れ, now 検 please で あ る.

项目成果

K.Nasu,H.Kohsaka,Y.Nonomura,Y.Terada,H.Ito,……N,Miyasaka: "Adenoviral transfer of cyclin-dependent kinase inhibitor genes suppresses collagen-Induced arthritis in mice."Journal of Immunology. 165. 7246-7252 (2000)

K.Nasu、H.Kohsaka、Y.Nonomura、Y.Terada、H.Ito、...N、Miyasaka：“细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂基因的腺病毒转移可抑制小鼠胶原诱导的关节炎。”免疫学杂志。 165.7246-7252 (2000)

Nonomura Y, Kohsaka H, et al.: "Suppression of arthritis by forced expression of cyclin-dependent kinase Inhibitor p21Cip1 gene into the joints."International Immunology. 13(6). 723-731 (2001)

Nonomura Y、Kohsaka H 等人：“通过强制将细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 p21Cip1 基因表达到关节中来抑制关节炎。”国际免疫学。

Kohsaka H. Nasu K. Nonomura Y, Miyasaka N.: "Treatment of arthritis with cyclin-dependent kinase inhibitor"Japanese Journal of Clinical Immunology. 23(6). 550-552 (2001)

Kohsaka H. Nasu K. Nonomura Y、Miyasaka N.：“用细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂治疗关节炎”日本临床免疫学杂志。

Y.Nonomura,H.Kohsaka,K.Nasu,Y.Terada,M.Ikeda,N.Miyasaka: "Suppression of arthritis by forced expression of cyclin-dependent kinase inhibitor P21Cip1 gene into the joints."International Immunology. (In press). (2001)

Y.Nonomura、H.Kohsaka、K.Nasu、Y.Terada、M.Ikeda、N.Miyasaka：“通过将细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 P21Cip1 基因强制表达到关节中来抑制关节炎。”国际免疫学。