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B細胞抗原受容体シグナリングにおけるSHP-1とアダプター分子の機能解析

SHP-1 和接头分子在 B 细胞抗原受体信号传导中的功能分析

基本信息

批准号：
12051244
负责人：
水野一也
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12051244/
关键词：
チロシンホスファターゼアダプター分子 SHP-1 BLNK SLP-65 SLP-76

项目摘要

本研究では、SHP-1がBCRシグナルをどのように制御しているのかについて解析を進め、以下の結果を得た(1)WEHI-231細胞に酵素活性を欠失させた変異型SHP-1(SHP-1-C/S)を発現させてBCRを刺激すると、B細胞特異的に発現するアダプター分子であるBLNKのチロシンリン酸化の亢進が認められ、さらにin vitroでSHP-1がBLNKを脱リン酸化することから、BLNKがB細胞におけるSHP-1の生理的基質であると結論づけた。さらにSHP-1-C/S発現細胞では、BCR刺激により誘導されるJNKの活性化が特異的に亢進するとともにアポトーシスの程度が有意に抑制されていた。この抑制効果はドミナントネガティブのMKK4(JNKを活性化するキナーゼ)を導入することにより解除されたことから、JNK活性化とアポトーシス抑制との関連性が示唆された。(投稿準備中)。(2)BLNKのリン酸化状態の変化とJNKの活性化とを結びつける候補分子として、TRAF2、Vav、Nck、HPK1などが想定される。そこで、これらの分子について野生型およびドミナントネガティブとして機能する変異型をWEHI-231細胞で発現させるcDNAコンストラクトを作成した。(3)SLP-76は、BLNKと構造上相同性が高く、T細胞特異的に発現するアダプター分子であることが報告されている。我々は以前に、SLP-76がWEHI-231に発現しており、SHP-1と構成的に結合していることを見出したことから、SLP-76についても(1)と同様の解析を加えてSLP-76がB細胞においてSHP-1の基質になっている可能性について検討した。その結果、少なくともWEHI-231細胞と成熟B細胞株であるBAL-17においてSLP-76もSHP-1の基質になっていることが確認された。(投稿準備中)

In this study, SHP-1 was isolated from BCR cells and analyzed. The following results were obtained: (1) Loss of enzyme activity in WEHI-231 cells and variant SHP-1 (SHP-1-C/S) is expressed in BCR stimulation, B cell-specific expression of B-cell-specific protein molecules, and the activation of BLNK protein in vitro. In addition, SHP-1-C/S-producing cells were stimulated by BCR, and JNK activation was specifically increased and inhibited. The effect of this inhibition is that MKK4(JNK) is activated. (In preparation for submission). (2) The change of acidification state of BLNK, the activation of JNK and the formation of candidate molecules such as TRAF2, Vav, Nck and HPK1 are considered. The wild type and functional variants of the gene were produced in WEHI-231 cells. (3)SLP-76 and BLNK have high structural identity, and T cell-specific molecular expression is reported. I have previously discussed the possibility of SLP-76 combining with WEHI-231, SHP-1 and B cell matrix. These results confirm that many WEHI-231 cells and mature B cell lines can be found in the matrix of BAL-17 and SLP-76 and SHP-1. (In preparation for submission)