NK細胞による腫瘍細胞認識の分子機構

NK细胞识别肿瘤细胞的分子机制

• 批准号: 12213024
• 负责人: 瀧 伸介
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213024/
• 关键词: NFAT; retrovirus; library; NK細胞; リンパ球活性化分子; シグナル伝達分子; expression cloning; レポーター遺伝子

リンパ球、特にNK細胞の活性化分子を明らかにする目的で、NFAT-GFPレポーター遺伝子とレトロウィルスcDNAライブラリーを用いた新たな遺伝子クローニング法を確立した。レトロウィルスベクターを用いたcDNAライブラリーは、様々な細胞に遺伝子導入することができ、さらに遺伝子の発現が持続的であるため機能的スクリーニングを可能にする。一方、スクリーニング用の細胞としてレポーター遺伝子NFAT-GFPを導入し、TCR等の刺激に対してGFPを発現するT細胞ハイブリドーマを作成した。この細胞に、cDNAがCD8とのキメラ分子として発現するように設計したレトロウィルスライブラリーを導入し、抗CD8抗体で活性化された時に、GFP陽性となる細胞をソーティングにて採取し、クローニングした。その結果、脾臓のライブラリーからはIgα,Igβ,CD3ε,ZAP70,Syk等の分子、NK細胞のライブラリーからはFcRγ,DAP12,ZAP70等既にシグナル伝達分子として知られているものが同定され、本手法(NACSと呼ぶ)はリンパ球の活性化分子の探索に有用であることが分かった。加えて、新規分子として細胞表面分子NFAT activating Molecule 1(NFAM1)が見いだされた。NFAM1は細胞内部位にITAM用の配列YxxLx(7-8)YxxMを持ち、リンパ細胞にNFAM1を遺伝子導入すると、NFAT-GFPレポーターを活性化することができた。さらに、このITAM様部位のチロシン(Y)をフェニルアラニンに置換すると、活性化シグナルを伝えないことから、このITAM様部位はNFAM1のシグナル伝達に必須の領域である。NK細胞のcDNAライブラリーからもいくつが未知の分子がクローニングされた。今後は、これら新規分子についても解析を進め、NK細胞の活性化機構を明らかにするとともに、NFAM1の機能について解析を進める予定である。

リ ン パ ball, molecular を の に NK cell activeness Ming ら か に す る purpose で, NFAT - GFP レ ポ ー タ ー posthumous son 伝 と レ ト ロ ウ ィ ル ス cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を with い た new た な posthumous son 伝 ク ロ ー ニ ン を グ method established し た. レ ト ロ ウ ィ ル ス ベ ク タ ー を with い た cDNA ラ イ ブ ラ リ ー は, others 々 な cells に heritage 伝 son import す る こ と が で き, さ ら に posthumous son 伝 の 発 が now hold 続 で あ る た め functionary ス ク リ ー ニ ン グ を may に す る. Side, ス ク リ ー ニ ン グ with の cells と し て レ ポ ー タ ー heritage 伝 son NFAT - GFP を import し, TCR の stimulate に し seaborne て GFP を 発 now す る t-cell ハ イ ブ リ ド ー マ を made し た. こ の cell に, cDNA が CD8 と の キ メ ラ molecular と し て 発 now す る よ う に design し た レ ト ロ ウ ィ ル ス ラ イ ブ ラ リ ー を import し で activeness, anti CD8 antibody さ れ た に, GFP positive と な る cells を ソ ー テ ィ ン グ に て し, ク ロ ー ニ ン グ し た. そ の results, splenic の ラ イ ブ ラ リ ー か ら は Ig alpha, beta, Ig CD3 epsilon, ZAP70, Syk の molecules, such as NK cells の ラ イ ブ ラ リ ー か ら は FcR gamma, DAP12, ZAP70 etc. Both に シ グ ナ ル 伝 operatives と し て know ら れ て い る も の が with fixed さ れ, this technique (NACS と shout ぶ) は リ ン パ の The exploration of activated molecules に is useful for である とが とが and った. Add えて, new regulation Molecule と て cell surface molecule NFAT activating Molecule 1(NFAM1)が see だされた だされた. NFAM1 は cells within a に ITAM の paired with column YxxLx (7-8) YxxM を hold ち, リ ン パ cells に NFAM1 を heritage 伝 son import す る と, NFAT GFP レ ポ ー タ ー を activeness す る こ と が で き た. さ ら に, こ の ITAM others parts の チ ロ シ ン (Y) を フ ェ ニ ル ア ラ ニ ン に replacement す る と, active シ グ ナ ル を 伝 え な い こ と か ら, こ の ITAM others parts は NFAM1 の シ グ ナ ル 伝 must reach に の field で あ る. NK cells の cDNA ラ イ ブ ラ リ ー か ら も い く つ が の unknown molecular が ク ロ ー ニ ン グ さ れ た. Future は, こ れ ら new rules on molecular に つ い て も parsing の を め, NK cell activeness institutions を Ming ら か に す る と と も に, NFAM1 の function に つ い て parsing を into め る designated で あ る.

项目成果

Arase,H.: "Immune complex and Fc receptor-mediated augmentation of antigen presentation for in vivo Th cell responses."J.Immunol.. 164. 6113-6119 (2000)

Arase,H.：“免疫复合物和 Fc 受体介导的体内 Th 细胞反应的抗原呈递增强。”J.Immunol.. 164. 6113-6119 (2000)

Arase,H.: "CD8^+ T cell-mediated skin disease in mice lacking IRF-2, the transcriptional attenuator of interferon-α/β signaling."Immunity. 13. 643-655 (2000)

Arase, H.：“缺乏 IRF-2（干扰素-α/β 信号转导的转录衰减因子）的小鼠中 CD8^+ T 细胞介导的皮肤病。”免疫。 13. 643-655 (2000)

Arase,H.: "The quantity of TCR signal determines positive selection and lineage commitment of T cells."J.Immunol.. 166. 6252-6261 (2000)

Arase,H.：“TCR 信号的数量决定 T 细胞的正选择和谱系定型。”J.Immunol.. 166. 6252-6261 (2000)

Arase,H.: "Regulation of cell surface expression of CTLA-4 by secretionof CTL-4-containing lysosomes upon activation of CD4^<(+> T cells."J.Immunol.. 165. 5062-5068 (2000)

Arase，H.：“CD4^<( > T 细胞活化时，通过分泌含有 CTL-4 的溶酶体来调节 CTLA-4 的细胞表面表达。”J.Immunol.. 165. 5062-5068 (2000)

Arase,H.: "Negative regulation of expression and function of Fc γ RIII byCD3 ζ in murine NK cells."J.Immunol.. 166. 21-25 (2001)

Arase, H.：“小鼠 NK 细胞中 CD3 ζ 对 Fc γ RIII 的表达和功能的负调节。”J.Immunol.. 166. 21-25 (2001)