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NK細胞による腫瘍細胞認識の分子機構

NK细胞识别肿瘤细胞的分子机制

基本信息

批准号：
12213024
负责人：
瀧伸介
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

リンパ球、特にNK細胞の活性化分子を明らかにする目的で、NFAT-GFPレポーター遺伝子とレトロウィルスcDNAライブラリーを用いた新たな遺伝子クローニング法を確立した。レトロウィルスベクターを用いたcDNAライブラリーは、様々な細胞に遺伝子導入することができ、さらに遺伝子の発現が持続的であるため機能的スクリーニングを可能にする。一方、スクリーニング用の細胞としてレポーター遺伝子NFAT-GFPを導入し、TCR等の刺激に対してGFPを発現するT細胞ハイブリドーマを作成した。この細胞に、cDNAがCD8とのキメラ分子として発現するように設計したレトロウィルスライブラリーを導入し、抗CD8抗体で活性化された時に、GFP陽性となる細胞をソーティングにて採取し、クローニングした。その結果、脾臓のライブラリーからはIgα,Igβ,CD3ε,ZAP70,Syk等の分子、NK細胞のライブラリーからはFcRγ,DAP12,ZAP70等既にシグナル伝達分子として知られているものが同定され、本手法(NACSと呼ぶ)はリンパ球の活性化分子の探索に有用であることが分かった。加えて、新規分子として細胞表面分子NFAT activating Molecule 1(NFAM1)が見いだされた。NFAM1は細胞内部位にITAM用の配列YxxLx(7-8)YxxMを持ち、リンパ細胞にNFAM1を遺伝子導入すると、NFAT-GFPレポーターを活性化することができた。さらに、このITAM様部位のチロシン(Y)をフェニルアラニンに置換すると、活性化シグナルを伝えないことから、このITAM様部位はNFAM1のシグナル伝達に必須の領域である。NK細胞のcDNAライブラリーからもいくつが未知の分子がクローニングされた。今後は、これら新規分子についても解析を進め、NK細胞の活性化機構を明らかにするとともに、NFAM1の機能について解析を進める予定である。

The activation molecules of the special NK cell and the NFAT-GFP cell are known to be the target, the NFAT-GFP cell is the target, the cDNA cell is the active molecule, and the new method is used to make sure that the cell is fixed. Please tell me that you need to use the cDNA to make sure that you have a problem, and that you may not be able to do so. On the other hand, one party, the other party, used the stimuli, such as the NFAT-GFP input, the TCR, and so on, to stimulate the T cells in the first place. The activation of anti-CD8 antibody, the activation of anti-CD8 antibody and the activation of anti-CD8 antibody. The results showed that Ig α, Ig β, CD3 ε, ZAP70,Syk and other molecules, NK cells, FcR γ, DAP12,ZAP70 and other molecules were detected. In this technique (NACS call), it is useful to explore the active molecules. The cell surface molecule NFAT activating Molecule 1 (NFAM1) was added to the cell surface molecule. The ITAM of the intracellular part of NFAM1 cells was arranged with YxxLx (7-8) YxxM to hold, the cells were NFAM1, the cells were loaded, and the cells were activated. It is necessary to verify that the location of the ITAM, the NFAM1 of the ITAM, and the location of the NFAM1 must be reached. NK cells are known as cDNA molecules, unknown molecules, unknown molecules. In the future, the molecular analysis of new regulations has been carried out, and the activation mechanism of NK has made clear that it is necessary to determine the accuracy of molecular analysis and the prediction of NFAM1 analysis.