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転移性上皮癌ワクチン開発の基礎的研究

转移性上皮癌疫苗开发的基础研究

基本信息

批准号：
12213135
负责人：
七條茂樹
金额：
$ 2.69万
依托单位：
Kurume University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213135/
关键词：
癌拒絶抗原細胞傷害性T細胞ペプチド抗原 lck 転移癌異所性発現

项目摘要

食道癌患者末梢血より樹立した細胞傷害性T細胞(KE4-CTL)を用いて新たにクローニングした遺伝子の塩基配列がlckと同じであった。本遺伝子産物のp56^<lck>は、リンパ球系細胞の増殖や機能発現に関与する事はよく知られているが、転移性大腸癌や肺癌の一部でも異所性に発現している事から、本分子が転移癌と関連した癌ワクチンの候補になり得るかどうかを検討した。(a)lckは正常細胞・組織ではType IIプロモーターが関与しているのに対して、癌細胞では主にType Iが関与していることがRT-PCRで確認され、タンパク質レベルでは両者共同じ易動度のタンパク質としてウエスタンブロット法で検出された。(b)タンパク質の発現は正常細胞でも認められたがKE4-CTLは認識しなかった。しかし、癌細胞と正常細胞に対するCTLの認識の違いに関する機序に関しては現在のところ明らかではない。(c)HLA-A24結合モチーフを有するペプチドを合成し、C1R/A*2402細胞株と反応させた後CTLが産生するIFN-γを測定し、KE4-CTLがHLA-A24拘束性に認識するペプチド抗原を3種類(Lck208-218,Lck486-494およびLck488-497)同定した。次に、患者末梢血PBMCをこれらの3種類のペプチド抗原で刺激し、限界希釈法でCTLの誘導頻度を計算で求め、CTL前駆細胞の割合を予測した。KE4細胞株に特異的なCTLのin vitroでの誘導を試みたところ、転移癌患者ではペプチド刺激していない群でも前駆細胞が認められ、刺激することにより増強されることが示唆されたが、非転移癌患者および健常人では前駆細胞出現頻度の増強は認められなかった。以上の実験成績から、本ペプチドが、特に転移癌の癌ワクチン候補となりうることが示唆された。

The peripheral blood of patients with esophageal cancer is used to establish cytotoxic T cells (KE4-CTL). The p56 gene of this gene <lck>product is related to the proliferation and function development of globular cells. It is known that this gene is related to metastatic colorectal cancer and lung cancer. (a) RT-PCR was used to confirm the common mobility of normal cells and tissues and cancer cells. (b)The quality of the product is normal. The product is KE4-CTL. The mechanisms involved in CTL recognition in cancer cells and normal cells (c)HLA-A24 binding protein synthesis, CTL production by C1R/A*2402 cell line and anti-HLA-A24 binding protein production by KE4-CTL were determined. Three types of HLA-A24 binding proteins (Lck208-218,Lck486-494 and Lck488-497) were identified. In addition, the frequency of CTL induction was calculated and the cleavage of CTL cells was predicted by the method of limiting the number of different antigens in PBMC. The induction of CTL specific to KE4 cell line in vitro was tested in patients with metastatic cancer, and the frequency of occurrence of CTL in non-metastatic cancer patients and healthy individuals increased. The above results show that there are no obvious differences between the two groups.