がん細胞膜トランスポーターをターゲットとした化学療法の最適化

针对癌细胞膜转运蛋白的化疗优化

• 批准号: 12217055
• 负责人: 辻 彰
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217055/
• 关键词: オリゴペプチド; トランスポーター; 抗がん剤; ベスタチン; グリシルサルコシン; 腫瘍; ヌードマウス; ドラックデリバリー

ペプチドトランスポーターが発現することにより、がん細胞へのペプチド性抗がん剤の移行性が上昇するかを、in vitroおよびin vivoで以下のように検討した。1.hPEPT1を過剰発現するモデル腫瘍の樹立ヒト小腸オリゴペプチドトランスポーターhPEPT1cDNAをHeLa細胞にトランスフェクションし、安定発現細胞(HeLa-hPEPT1)を得た。同様に空ベクターでトランスフェクションを行い、陰性対照細胞(HeLa-pcDNA3)を得た。両細胞へのペプチド性抗がん剤[^3H]ベスタチン取り込み活性について検討を行ったところ。HeLa-hPEPT1の取り込みはHeLa-pcDNA3と比較して約5倍に増加した。HeLa-hPEPT1への取り込みは非標識グリシルサルコシンおよび非標識ベスタチンの共存により有意に低下した。更に[^3H]グリシルサルコシン取り込みに対するベスタチンによる阻害効果も検討したところIC50値約0.56mMが得られた。この値はhPEPT1を発現する小腸モデル細胞Caco-2の示すベスタチンのKm値0.34mMとよく一致した。これらの結果からhPEPT1を過剰発現する腫瘍細胞株を樹立できたと考えられた。2.in vivoにおけるペプチドの腫瘍への蓄積ヌードマウス(Balb/c nu/nu)の背部皮下にHeLa-hPepT1もしくはHeLa-pcDNA3を移植し腫瘍を形成させた担がんマウスに、ベスタチンあるいは[^3H]カルノシンを投与し30分後の組織対血漿中濃度比(Kp値)を求めたところ、HeLa-hPEPT1移植により形成した腫瘍では、それぞれKp値約2.0および2.5と算出された。この値は細胞間液のみ分布する[^<14>C]イヌリンの値(約0.5)と比べ有意に高いことから、両ペプチドが腫瘍細胞内に取り込まれていることが示された。一方HeLa-pcDNA3移植により形成した腫瘍については、ペプチドの蓄積は認められなかった。以上の結果より、hPEPT1の発現によりペプチド性化合物の腫瘍への蓄積が上昇する可能性が示された。

The migration resistance of the cell is increased in vitro and in vivo. 1. hPEPT1 cDNA was isolated from HeLa cells and stable cells (HeLa-hPEPT1). In the same way, negative control cells (HeLa-pcDNA3) were obtained. The cell's selection of the resistance to the disease [^3H] is based on the activity of the disease. HeLa-hPEPT1 is about 5 times higher than HeLa-pcDNA3. HeLa-hPEPT1 In addition, the IC50 value of [^3H] is about 0.56 mM This value is consistent with the Km value of 0.34 mM for small intestine cell Caco-2, which is found in hPEPT1. The results showed that hPEPT1 cells were successfully established. 2.in vivo (Balb/c nu/nu) HeLa-hPepT1/HeLa-pcDNA3/HeLa-hPepT1/HeLa-pcDNA3/HeLa-hPepT1/HeLa-pcDNA3/HeLa-hPepT 1/HeLa-hPepT1/HeLa-pcDNA 3/HeLa-hPepT 1/HeLa-hPepT 1/HeLa-pcDNA 3/HeLa-hPepT1/HeLa-pcDNA 3/HeLa-hPepT 1/HeLa-pcDNA/HeLa-hPepT1/HeLa-pcDNA/HeLa-hPepT1/HeLa-pcDNA/HeLa-hPepT1/HeLa-hPep Kp = 2.0 ~ 2.5 The <14>value of the cell fluid distribution is about 0.5, which is higher than the value of the cell fluid distribution. One side of HeLa-pcDNA3 transplantation is formed by swelling and accumulation. The above results indicate the possibility of increased accumulation of tumor cells due to the presence of hPEPT1

项目成果

Hirohashi,T.: "Function and expression of multidrug resistance-associated protein family in human colon adenocarcinoma cells (Caco-2)"J.Pharmacol.Exp.Ther.. 292・1. 265-270 (2000)

Hirohashi, T.：“人结肠腺癌细胞中多药耐药相关蛋白家族的功能和表达（Caco-2）” J.Pharmacol.Exp.Ther.. 292・1（2000）。

Nakanishi,T.: "Cancer cell-targeted drug delivery utilizing oligopeptide transport activity"Int.J.Cancer. 88・2. 274-280 (2000)

Nakanishi，T.：“利用寡肽转运活性的癌细胞靶向药物递送”Int.J.Cancer 88・274-280（2000）。

Ogihara,T.: "Structural requirement of substrates for stereoselective monocarboxylate tranaport in Caco-2 cells"Pharm.Pharmacol.Commun.. 6. 161-165 (2000)

Ogihara,T.：“Caco-2 细胞中立体选择性单羧酸转运底物的结构要求”Pharm.Pharmacol.Commun.. 6. 161-165 (2000)