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アンチセンス発現アデノウイルスを用いたトランスポーターの薬物体内動態制御機能評価

使用反义表达腺病毒评估转运蛋白药代动力学控制功能

基本信息

批准号：
14657615
负责人：
辻彰
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

1997年に我々が発見した有機カチオントランスポーターOCTN1は、腎刷子縁膜に存在することが想定されていながらその分子的実体が未だ不明である有機カチオン輸送体と、機能的に類似していることが遺伝子発現系を用いた解析により示されている。しかし腎以外の臓器における機能は未だ不明である。本研究ではアデノウイルスベクターを用い、in vivoでOCTN1に対するアンチセンス遺伝子を導入することでその遺伝子発現を抑制し、OCTN1の生理的役割を評価することを目的とした。マウスあたり2.4x10^9PFUの力価で、OCTN1アンチセンスをコードしたアデノウイルスを頸静脈投与したところ、2-3日後には肝において遺伝子導入マーカーの発現が見られた。RT-PCRにより、肝にOCTN1が存在すること、および導入したアンチセンスが発現していることを確認した。一方で14日後にはGFPの蛍光は消失していた。以上よりアンチセンス一過性導入の実験系を確立することができた。この系において単離肝切片を調製しOCTN1の典型的基質であるtetraethylammonium (TEA)の取り込みを検討したところ、顕著な取り込みが観察されたもののAdmOCTN1.ASの導入により肝臓への取り込みに顕著な変化は観察されなかった。また感染2日後のマウスに放射標識TEAを投与しその胆汁排泄を検討したところ、胆汁中のTEA回収量にも有意な変化は見られなかった。一方でセンス鎖をコードしたアデノウイルスを感染させた際には、以前に肝において基質の輸送活性が認められ、今回血液脳関門においても輸送活性の上昇を認めることができた。従って、本実験系はトランスポーターの持つ生物学的活性の評価や薬物デリバリーには有用である一方で、遺伝子ノックダウンによる生理的役割解明への応用にはさらなる検討が必要であると考えられる。

In 1997, we have seen that there are two types of equipment, such as OCTN1 and brush membranes, in which there is an unknown device that is not known to be used in the system. Other than the equipment, the machine is not known to be unknown. The purpose of this study is to investigate the effects of in vivo, OCTN1, and so on on the detection of inhibition and OCTN1 physiology in this study. After 2-3 days, the liver will be dropped into the box after 2-3 days. After 2-3 days, there will be a lot of damage to the liver. There is a bad situation in the RT-PCR and liver OCTN1. Please confirm that you have not received any information. After 14 days, the GFP light disappeared and the light disappeared. As soon as the above information is available, you will make sure that you have made sure that you do not have any information. The OCTN1 was isolated from the liver section. The typical tetraethylammonium (TEA) was extracted from the liver. It was observed that the AdmOCTN1.AS was imported into the liver, and that it was changed. Two days after infection, the radiation-labeled TEA was injected into the bile and the bile was excreted. The amount of TEA in the bile was measured. One party said that they were infected in the international market. In the past, the liver was used to send active drugs, and this time, the blood samples were used to send active drugs. The purpose of this study is to maintain the activity of biology in order to understand the biological activity. it is necessary to know that it is necessary to understand the physiology of the disease.