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トランスジェニックマウスを用いたHIV特異的キラーT細胞の認識と機能の解析

使用转基因小鼠分析 HIV 特异性杀伤 T 细胞的识别和功能

基本信息

批准号：
13015202
负责人：
山崎晶
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13015202/
关键词：
HIV CTL IL-2 TCR トランスジェニックマウスレパトアモノクローナル抗体

项目摘要

HIV初期感染防御にCTLが重要な役割を果たしていることが報告されているが、その詳細な機構は明らかではない。そこで、HIVに対するCTL活性化機構をin vivoで解明するため、HIV env gp160P18IIIB特異的CTLクローンRT-1由来TCRのTgマウスを作製し、抗原認識機構、CTL分化機構の解析を進めている。これまでにこのTgマウスを用いて、1)クロノタイプ特異的抗体の作成、2)TCRα鎖優位な抗原認識機構の解明、3)IL-2によるTCRシグナル非依存性CTL分化機構の発見、4)CD8+T細胞をHIV-Tgマウスに移入することによるin vivoでの抗原認識、を報告してきた。1)TCRα鎖優位な抗原認識機構の解明・non Tgマウス由来naive CD8+細胞よりVα42H11を有するTCRα鎖をランダムにクローニングし、予めRT-1β鎖を発現させたTG40に各々導入してその抗原応答を調べたところ、応答するクローンは見出されなかった。・抗原刺激を加えたRT-1α鎖Tgマウスより得られたβ鎖を再構成させたTG40において応答が確認されたクローンに関してTCRと抗原とのaffinityを調べたところ、ほとんどがRT-1そのものと同等なaffinityで応答を示すことが判明した。→α鎖に強く依存するRT-1 TCRの抗原認識機構が確証された。2)IL-2によるTCRシグナル非依存性CTL分化機構の解析・RT-1αβT細胞を用いて様々な細胞周期ブロッカー存在下で刺激し、CTL活性を調べた。その結果、MimosineのみがCTL活性を完全に阻害できることが判明した。→他の薬剤同様IL-2R誘導は阻害せず、cell cycleは阻害するが、CTL活性のみを完全に抑制することから、IL-2からCTL分化誘導へ至るシグナル伝達経路を解析する優れたツールとなり得ると考えられた。

CTL is an important tool for early HIV infection prevention. HIV env gp160 P18 IIIB-specific CTL activation mechanism in vivo analysis, antigen recognition mechanism, CTL differentiation mechanism analysis. 1) Preparation of antibody-specific antibody, 2) Identification of antigen-recognition mechanism of TCRα lock, 3) Identification of antigen-independent CTL differentiation mechanism of IL-2, 4) Antigen recognition in vivo of CD8 +T cells in HIV-Tg migration. 1)TCRα lock priority antigen recognition mechanism of non-Tg, it is derived from naive CD8 + cells, Vα42H11, the existence of TCRα lock, the development of RT-1β lock, TG40, each of the introduction of antigen response, modulation, response, and the emergence of a new antigen. Antigen stimulation is added to RT-1α-lock Tg, and β-lock TG40 is added to confirm RT-1 α-lock affinity.→α-lock is strongly dependent on RT-1 TCR antigen recognition mechanism confirmed. 2)IL-2-mediated TCR pathway analysis of independent CTL differentiation mechanisms. RT-1αβT cells were stimulated and CTL activity was modulated in the presence of cell cycle regulators. As a result, Mimosine completely inhibited CTL activity.→ Other chemicals such as IL-2R induce inhibition, cell cycle inhibition, CTL activity complete inhibition, IL-2 induced CTL differentiation, and CTL pathway analysis.