プロモータートラップを用いたT細胞活性化に伴って誘導される遺伝子の検索

使用启动子陷阱寻找 T 细胞激活时诱导的基因

• 批准号: 13206010
• 负责人: 山崎 晶
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13206010/
• 关键词: プロモータートラップ; T細胞; GFP; スプライシングアクセプター; レロトウイルス

<背景と目的>本研究は、マーカー遺伝子がランダムに挿入されたプロモータートラップ細胞ライブラリーを用いて、未知遺伝子も含め、特定の発現パターンを示す遺伝子群を網羅的に解析することを目的とする。具体的には、T細胞をモデルとしてGFP、或いはβ-Geoをマーカーとしたプロモータートラップ細胞ライブラリーを構築し、様々なT細胞抗原受容体(TCR)刺激に伴って発現が上昇する遺伝子(群)を探索する。以上の解析により方法論を確率し、広く様々な細胞への応用をはかる。また、得られた細胞クローンをさらに刺激の種類、時間、免疫抑制剤の有無で比較し、特異的に誘導される遺伝子のパターンを明らかにする。すなわち、多様なT細胞応答を規定する遺伝子発現パターンを網羅的に解析するのみならず、既知遺伝子だけでなく、未知遺伝子をも対象としたクラスター解析の方法論確立を目的としたものである。<検討結果>1)GFP、blastcidine deaminase-Geoをレポーターとしたレトロウイルストラップベクターを構築し、実際にトラップベクターとして機能することを確認した。2)TCR刺激に対して死を起こさない抗原特異的T細胞ハイブリドーマ2B4PTを樹立し、この細胞を用いてT細胞トラップライブラリーを構築した。3)T細胞トラップライブラリーより、抗TCR抗体刺激に応答してレポーター遺伝子の発現が有意に上昇するクローンを、GFPを指標としたcell sorting、β-Geoを用いた薬剤耐性能により取得した。それらの応答クローンより、RACE法を用いてトラップされた遺伝子を単離した。単離された遺伝子はそれぞれ、known4個、unknown3個であり、何れもこれまでTCR下流での誘導が報告されていないものであった。<考察>本法で用いたトラップベクターを用いることで、これまでTCR刺激による誘導が報告されていない遺伝子、特に転写、翻訳に関わる因子を効率よく同定できることが判明した。今後このトラップ細胞ライブラリーのサイズを拡大し、刺激の差異によって発現が変化する遺伝子を網羅的に探索していく予定である。

& lt; background purpose & gt; in this study, the target of this study is to show that the purpose of this study is to analyze the target of the sub-group network. Specific cell antigen receptor, T cell antigen receptor GFP, or β-Geo cell antigen receptor (TCR) stimulation is associated with the discovery of the cell antigen receptor subgroup (group). The above methods are used to determine the accuracy rate and the accuracy rate. There is a difference in the number of stimuli, time, and immunosuppression in general, time, and immunosuppression. there is a difference in the amount of time, time, and immunosuppression. there is a difference in the amount of time, time, and immunosuppression. there is a difference in the amount of time, time, and time. It is stipulated that the analysis of the Internet is not available in the Internet, and that both the known and the unknown are affected, as is the case with the analysis method. & lt; results & gt;1) GFP, blastcidine deaminase-Geo, computer, and so on. 2) TCR stimulates the death of antigen specific T cells in T cells, 2B4PT cells in T cells and T cells in T cells. 3) T

项目成果

Iwashima, M.: "Genetic evidence for Shc requirement in TCR-induced c-Rel nuclear translocation and IL-2 expression"Proc. Natl. Acad. Sci.. (In Press).

Iwashima, M.：“TCR 诱导的 c-Rel 核易位和 IL-2 表达中 Shc 需求的遗传证据”Proc。

Takeuchi, A.: "E2A and HEB activate the pre-TCRα promoter during immature T cell development"J. Immunol.. 167. 2157-2163 (2001)

Takeuchi, A.：“E2A 和 HEB 在未成熟 T 细胞发育过程中激活前 TCRα 启动子”J.Immunol.. 167. 2157-2163 (2001)

Yamasaki, S.: "Docking protein Gab2 is phosphorylated by ZAP-70 and negatively regulates T cell recepor signaling by recruitment of inhibitory molecules"J. Biol. Chem.. 276. 45175-45183 (2001)

Yamasaki, S.：“对接蛋白 Gab2 被 ZAP-70 磷酸化，并通过招募抑制分子来负调节 T 细胞受体信号传导”J.

Tomita, K.: "Cytokine-independent Jak3 activation upon TCR stimulation through direct association of Jak3 and the TCR complex"J. Biol. Chem.. 276. 25378-25385 (2001)

Tomita, K.：“通过 Jak3 和 TCR 复合物的直接关联，TCR 刺激时独立于细胞因子的 Jak3 激活”J.