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スーパー抗原に特異的なT細胞活性化シグナルの解析

超抗原特异性 T 细胞激活信号分析

基本信息

批准号：
12770162
负责人：
山崎晶
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770162/
关键词：
スーパー抗原チトクローム NF-AT GFP EMS TCR シグナルの解析 cDNAライブラリーシグナル伝達

项目摘要

スーパー抗原によるT細胞活性化に特異的に関与するシグナル伝達分子の同定バクテリア内毒素などに代表されるスーパー抗原は、特定のTCR Vβ鎖を有するT細胞を強く活性化することが知られており、細胞内毒素ショックやある種の自己免疫疾患の原因であることも報告されている。ところが、その詳細な活性化シグナル伝達機構は不明である。我々は、チトクロームc特異的マウスT細胞ハイブリドーマ、2B4のvariantを解析する中で、抗原刺激や抗CD3抗体刺激には応答できるが、スーパー抗原に対しては反応できない変異T細胞を樹立した。そこで、この細胞株に欠損しているシグナル伝達経路を同定することを目的として、T細胞活性化に重要な転写因子、NF-ATの認識配列にGFPを連結したレポーター遺伝子を導入し、正常な活性化が起こると蛍光を発する細胞株を樹立した。このクローンにレトロウイルスに組み込んだマウスT細胞cDNAライブラリーを導入し、スーパー抗原刺激に応答して蛍光を発する細胞をソーティングにより回収した。実際、スーパー抗原応答性が回復したクローンが20クローン得られた。それらの細胞より導入された遺伝子をPCRにより取得したところ、複数のクローンから細胞骨格に関与する同一分子のcDNAが得られた。現在その分子とスーパー抗原応答との関連について解析中である。スーパー抗原によるT細胞活性化を制御する分子の解析・raftに局在するCbp(Csk binding protein)結合タンパク質として、EBP50をクローニングした。この分子を過剰発現させることにより、Cbp-EBP50-ERM-cytoskeleton結合を介した複合体が増強され、スーパー抗原による活性化を負に制御することが明らかとなった。・IR S-1ファミリーに属するGab2が、T細胞活性化に伴ってTCRにリクルートされ(LAT-Gadsとの結合を介する)、ZAP-70によってリン酸化を受け、更にPTPaseであるSHP-2と結合することによってTCR鎖の脱リン酸化を促し、実際スーパー抗原によるIL-2産生を負に制御することが明らかとなった。

T cell activation specific to the antigen and specific to the TCR Vβ lock is reported in this paper. The details of the activation of the mechanism are unknown. We have been able to analyze CD3 specific T cells, antigen-stimulated T cells and anti-CD3 antigen-stimulated T cells In addition, the cell lines were established by introducing GFP, an important gene for T cell activation, and by activating normal cells. The cells were stimulated by the antigen, and the cells were stimulated by the light. In fact, the antigen-responsive nature of the virus is very different from that of the virus. The cDNA of the same molecule was obtained by PCR from the cells. Now, there are molecules and antigens that are related to each other. Molecular analysis of T cell activation in the presence of Cbp(Csk binding protein) and EBP50 Cbp-EBP50-ERM-cytoskeleton binding complex increases in activity and decreases in activity. IR S-1 protein is associated with Gab2, T cell activation is associated with TCR protein (LAT-Gads and binding), ZAP-70 protein is associated with SHP-2 binding, and PTase is associated with TCR protein deacidification, and IL-2 production is associated with antigen-binding.