がん細胞の増殖とカベオリン

癌细胞增殖和小窝蛋白

• 批准号: 13216085
• 负责人: 石川 義弘
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216085/
• 关键词: カベオリン; アデニル酸シクラーゼ; α1アドレナリン受容体; カベオラ; G蛋白質; 心筋細胞; H9C2; フォルスコリン誘導体

1.ラット筋芽細胞H9C2、心筋組織、血管平滑筋細胞を用いてカベオリン分画の精製を行い、増殖刺激に関与するα1アドレナリン受容体および下流の信号分子の発現分布を検討した。α1受容体、G蛋白質Gq、PLC.βサブタイプ(β1、3)はカベオリン分画に発現が限局していた。さらにα1受容体とカベオリンは免疫沈降実験によって、強く共役していることがわかった。また肥大した心筋細胞でのカベオリン発現を調べ、カベオリン3の発現が有意に肥大心筋において減少していることを見出した。これからカベオリン3の発現低下が、増殖信号の脱抑制を生み、最終的に肥大化をもたらしたと推測された。2.培養筋原性腫瘍細胞においてカベオリンを誘導性に過大発現させる系を作成し、細胞増殖性と増殖性信号伝達における変化を検討した。カベオリン過大発現によって、カベオリン蛋白は3倍程度に上昇し、形態学的にも細胞膜陥凹構造であるカベオラ数の増大が見られた。カベオリン分画を精製して、発現されたリコンビナントカベオリンの細胞内分布を調べたところ、内因性のものと相違は見られなかった。アンギオテンシン刺激によるERK活性化はカベオリン発現細胞において有意に低下しており、2%FBS刺激存在下で^3Hチミジン取込みを検討した結果、取込み率の有為な減少がみられた。これらの抑制効果はカルシウムキレートやPKC阻害剤によって消失したから、カルシウム感受性PKCサブタイプによる関与が推測された。3.アデニル酸シクラーゼをサブタイプ選択的に制御する薬物を開発した。各サブタイプをバキュロウイルスシステムにより過大発現させ、フォルスコリン誘導体とコンピュータを用いた立体構造解析から選択された既知の化合物のスクリーニングを行った。この結果、2、3、5サブタイプのそれぞれに選択性を持つ刺激薬を見つけた。さらに5サブタイプを選択的に抑制する新規化合物を発見した。

1. ラ ッ ト H9C2 bud cells, heart muscle tissue, vascular smooth muscle cells を using い て カ ベ オ リ ン painting line の refined を い, raised colonization stimulus に masato and す る alpha 1 ア ド レ ナ リ ン by let body お よ び obscene の signaling molecules の 発 distribution を now beg し 検 た. The α1 acceptor, G protein Gq, PLC.βサブタ プ プ(β1, 3) カベ カベ リ <e:1> に distribution に occurrence が limit area て て た た た た た た た た た. さ ら に alpha 1 by the capacity of body と カ ベ オ リ ン は immune sink be 験 に よ っ て, strong く existing し て い る こ と が わ か っ た. ま た hypertrophy し た heart muscle cells で の カ ベ オ リ ン 発 を べ, now カ ベ オ リ ン 3 の 発 now が intentionally に enlarged heart muscle に お い て reduce し て い る こ と を shows し た. こ れ か ら カ ベ オ リ ン 3 の 発 now low が, raised colonization signal の derepression を み, eventually flow に fat "を も た ら し た と speculation さ れ た. 2. Cultivate reinforcement former sex is swollen sores cells に お い て カ ベ オ リ ン を induced excessive に 発 now さ せ る を し consummate, cell raised colonization sexual signal 伝 と raised colonization of に お け る variations change を beg し 検 た. Excessive カ ベ オ リ ン 発 now に よ っ て, カ ベ オ リ ン protein に rise し は 3 times, morphology に も membrane 陥 concave structure で あ る カ ベ オ ラ の raised large が see ら れ た. カ ベ オ リ ン points draw を refined し て, 発 さ れ た リ コ ン ビ ナ ン ト カ ベ オ リ ン の intracellular distribution を adjustable べ た と こ ろ, endogenous の も の と conceives は see ら れ な か っ た. ア ン ギ オ テ ン シ ン stimulus に よ る ERK activation は カ ベ オ リ ン 発 now cells に お い て deliberately low に し て お り, 2% FBS stimulus in the presence of で ^ 3 h チ ミ ジ ン take 込 み を beg し 検 た results, take 込 の み rate for な reduce が み ら れ た. こ れ ら の inhibition of unseen fruit は カ ル シ ウ ム キ レ ー ト や PKC inhibitor against tonic に よ っ て disappear し た か ら, カ ル シ ウ ム susceptibility PKC サ ブ タ イ プ に よ る masato and が speculation さ れ た. 3. ア デ ニ ル acid シ ク ラ ー ゼ を サ ブ タ イ プ sentaku に system royal す る 薬 content を open 発 し た. Each サ ブ タ イ プ を バ キ ュ ロ ウ イ ル ス シ ス テ ム に よ り too 発 now さ せ, フ ォ ル ス コ リ ン inductor と コ ン ピ ュ ー タ を with い た three-dimensional structure parsing か ら sentaku さ れ た already know の compound の ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た. Youdaoplaceholder5 <s:1> results, 2, 3, 5サブタ プ プ それぞれに それぞれに select 択 sexual を hold <s:1> stimulant を see けた けた. Youdaoplaceholder0 5サブタ プを プを select 択 に inhibitory する new regulation compound を appear at た.

项目成果

Ishikawa Y: "Type-specific regulation of adenylyl cyclase;selective pharmacological stimulation and inhibition of adenylyl cyclase isoforms"J.Biol.Chem.. 276. 47785-93 (2001)

Ishikawa Y：“腺苷酸环化酶的类型特异性调节；腺苷酸环化酶亚型的选择性药理学刺激和抑制”J.Biol.Chem.. 276. 47785-93 (2001)

Ishikawa Y: "Phospholipase Cbeta4 and protein kinase Calpha and/or protein kinase CbetaI are involved in the induction of long-term depression in cerebellar purkinje cells"J.Biol.Chem.. 276. 45236-45242 (2001)

Ishikawa Y：“磷脂酶 Cbeta4 和蛋白激酶 Cα 和/或蛋白激酶 CbetaI 参与小脑浦肯野细胞长期抑郁的诱导”J.Biol.Chem.. 276. 45236-45242 (2001)

Ishikawa Y: "Accumulation of molecules involved in α1-adrenergic signal within caveolae;caveolin expression and the development of cardiac hypertrophy"Cardiovascular Res.. 51. 709-716 (2001)

Ishikawa Y：“参与小窝内α1-肾上腺素信号的分子的积累；小窝蛋白的表达和心脏肥大的发展”心血管研究51. 709-716 (2001)

Ishikawa Y: "Trachea enhances neurite regeneration from adult rat nodose ganglia in vitro"Life Sciences. (2001)

Ishikawa Y：“气管在体外增强成年大鼠结状神经节的神经突再生”生命科学。

Ishikawa Y: "Changes in caveolin subtype protein expression in aging rat organs"Mol.Cell.Endocrinol.. 176. 91-95 (2001)

Ishikawa Y：“衰老大鼠器官中小窝蛋白亚型蛋白表达的变化”Mol.Cell.Endocrinol.. 176. 91-95 (2001)