バセドウ病眼症の発症機構の解明と新たな治療法の開発

阐明格雷夫斯眼病的发病机制并开发新疗法

基本信息

批准号：
01F00334
负责人：
中尾一和
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

バセドウ病眼症はバセドウ病に関連して眼窩組織のおこる自己免疫反応によって引き起こされる。その主要自己抗原の実態は依然不明であるが、有力な候補としてバセドウ病の自己抗原であるTSHレセプターが考えられている。実際、眼窩組織中にTSHレセプターmRNAや同蛋白の存在が示され、病態との関連も示唆されている。そこで今回、甲状腺特異的MHC-ClassII発現Transgenic mouseを作製し、機能解析を行った。甲状腺上皮細胞は自己免疫性甲状腺疾患の標的細胞であり、バセドウ病の甲状腺細胞においてMHC-ClassIIが過剰発現することが既に示されている。しかし、そのようなMHC-ClassII発現がバセドウ病の発病にどういう役割を果たしているかはまだ明らかではない。そこで、甲状腺細胞にMHC-ClassIIを特異的に発現するTransgenic mouseを作製し、そのmouseの甲状腺機能と自己免疫異常の有無についてまず検討した。ヒトTSHレセプターのpromoterとIAκ(α+β)遺伝子からなるDNA ConstructをC3H/He mouseに導入し、3つのTransgenic mouse (Tg mouse) line、(#1、#4、#5)を樹立した。免疫蛍光染色でIAκ(α+β)蛋白の甲状腺細胞の発現を調べ、#1と#5でMHC-ClassII発現を認めた。8-119週齢の様々の週齢のTg mouseの甲状腺組織像をHE染色で検討した。Tg mouseはWild type mouse (WT)に比べては明らかな異常は認めなかった。CD45の染色によるリンパ球浸潤の検討でも相違を認めなかった。8週齢のTg mouseのFT4はWTよりやや低かった(P<0.05)が、明らかな甲状腺機能異常は見出されなかった。8-12週齢のTg mouseの血清TRAb抗体を測定したが、有意な異常を認めなかった。現在のところバセドウ病やバセドウ病眼症の発症を認めていない。この結果は、同疾患を引き起こすには単なるMHC-ClassIIの発現だけでは不十分であることを示唆している。同トランスジェニックマウスの眼窩組織においては、これまで検討した限り、リンパ球の浸潤等を含めて眼症を示唆するような所見は得られなかった。今後同Tg mouseを用いて、MHC-ClassII発現甲状腺細胞の抗原提示細胞としての意義や免疫反応における役割についてさらに検討する予定である。

坟墓的眼科病是由与坟墓疾病相关的轨道组织中的自身免疫反应引起的。这种主要的自身抗原的实际状态仍然未知，但潜在的候选者是TSH受体，这是坟墓疾病的自我抗原。实际上，TSH受体mRNA和蛋白质的存在已显示在轨道组织中，这表明与病理有联系。因此，我们创建了表达MHC级II并进行功能分析的甲状腺特异性转基因小鼠。甲状腺上皮细胞是自身免疫性甲状腺疾病的靶细胞，并且已经证明它在Graves疾病甲状腺细胞中过表达MHC级II。但是，尚不清楚这种MHC级II表达在坟墓疾病发展中的作用。因此，在甲状腺细胞中产生了一种特异性表达MHC级II的转基因小鼠，首先检查了小鼠的甲状腺功能以及是否存在自身免疫异常。引入了由人TSH受体启动子和IAκ（α+β）基因组成的DNA构建体中，并建立了三个转基因小鼠（TG小鼠）系（＃1，＃4，＃5）。免疫荧光染色检查了IAκ（α+β）蛋白的甲状腺细胞的表达，并在＃1和＃5中观察到MHC-ClassII的表达。通过染色检查了TG小鼠的TG小鼠的甲状腺组织学。与野生型小鼠（WT）相比，TG小鼠没有显示出明显的异常。通过CD45染色检查淋巴细胞浸润时，没有观察到差异。 8周大的TG小鼠中的FT4略低于WT（P <0.05），但没有发现明显的甲状腺功能障碍。测量了8-12周龄时TG小鼠的血清TRAB抗体，但未观察到明显的异常。目前，尚未观察到坟墓疾病或坟墓疾病眼科病的发作。该结果表明，仅MHC级II的表达不足以引起该疾病。就我们研究而言，在转基因小鼠的轨道组织中没有表明眼科病，包括淋巴细胞浸润的发现。将来，我们将进一步研究MHC级II表达甲状腺作为抗原呈递细胞的重要性，并使用相同的TG小鼠在免疫反应中的作用。