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bach1/bach2二重ノックアウトマウスを用いたヘム応答性遺伝子制御システムの解析

使用bach1/bach2双敲除小鼠分析血红素反应基因调控系统

基本信息

批准号：
02F00526
负责人：
五十嵐和彦
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02F00526/
关键词：
bach1 bach2 クロマチンヘムヘムオキシゲナーゼグロビン

项目摘要

GST-Bach1融合蛋白質を大腸菌で発現・精製し,ウサギに注射し抗血清を計6種類得た。免疫沈降に使用可能な抗体をスクリーニングし,うち1つは内在性Bach1を免疫沈降できることを確認した。NIH3T3細胞を用いて,ヘミン処理前後のBach1-エンハンサー複合体の動態をクロマチン免疫沈降法で検討した。NIH3T3細胞では,HO-1の発現はごく低いが,細胞をヘミン(10μM)で処理することにより,2-3時間内にmRNA転写が強く誘導された。この時間経過で,HO-1エンハンサーへのBach1の結合量をクロマチン免疫沈降法で測定したところ,誘導前にはエンハンサーにBach1がMafKとの複合体として結合しているが,ヘミン処理後30分内にBach1がエンハンサーから解離することが明らかになった。この間,MafKはエンハンサーに結合したままであり,Bach1の解離とともに活性化サブユニットNrf2がエンハンサーに結合してくることも判明した。転写抑制や活性化に関わるクロマチン修飾を同様にクロマチン免疫沈降法で検討したところ,Bach1により転写が抑制されている状態でもクロマチンは活性化型の修飾(H3およびH4ヒストンのアセチル化やH3 K4のメチル化)を受けていた。Bach1はエンハンサーに結合し転写を抑制するが,この抑制は活性化の前段階に相当する状況にあること,すなわち,Bach1はエンハンサーやプロモーターにおける転写複合体を途中の段階に留め置くこと(poising)により転写を抑制すると考えられた。さらに,ヘムにBach1を標的としてその活性を変えることにより,エンハンサー上での転写抑制因子と活性化因子の動的変換を誘導することが理解された。すなわち,生命にとって必須の補欠分子ヘムが,核内では転写複合体の動態制御をも行うことが初めて明らかになった。

A total of 6 types of GST-Bach1 fusion proteins are available from Escherichia coli and purified and injected antisera from Escherichia coli. Immunoprecipitation can be used. Antibody をスクリーニングし, Intrinsic Bach 1をImmune sedimentation できることをConfirmation した. NIH3T3 cells were analyzed using immunosedimentation method to determine the dynamics of the Bach1-Etamine complex before and after treatment with NIH3T3 cells. NIH3T3 cells were treated with NIH3T3 cells, and HO-1 cells were treated with 10μM (10 μM), and the mRNA was written and induced in 2-3 hours.この时経passで,HO-1エンハンサーへのBach1のcombination amountをクThe immunosedimentation method of ロマチンでdetermination of したところ, pre-induction にはエンハンサーにBa ch1がMafKとのcomplexとしてcombinationしているが,ヘミンprocessed 30にBach1がエンハンサーからDissociationすることが明らかになった.この间,MafKはエンハンサーにcombinationしたままであり,Bach1のdissociationとともにActivated サブユニットNrf2 がエンハンサーに Combined してくることも clarified した. Inhibition, activation, modification, immunosedimentation, immunosedimentation, Bach1 methodり転WRITING が Suppression されているSTATE でもクロマチンは ACTIVATION TYPE MODIFICATION(H3およびH4ヒストンのアセチル化やH3 K4のメチル化)をReceivedけていた. Bach1はエンハンサーにcombinationし転を inhibitionするが,このinhibitionはactivationのprevious stageにquiteするconditionにあること,すなわち,Bach1はE-HandbookめSETくこと(poising)により転WRITE を suppress すると卡えられた.さらに,ヘムにBach1を本片としてそのActivityを変えることにより,エンハンThe author writes about the change of inhibitory factors and activating factors and the induction of them.すなわち, life にとって must make up for the molecule ヘムが, and the core では転WRITING COMPLEX のDYNAMIC CONTROL をも行うことが初めて明らかになった.