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ヘムオキシゲナーゼ1制御因子を標的とした虚血再潅流病態改善薬探索システムの開発

开发针对血红素加氧酶 1 调节因子的改善缺血再灌注病理学的药物发现系统

基本信息

批准号：
15659076
负责人：
五十嵐和彦
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659076/
关键词：
ヘムヘムオキシゲナーゼ転写因子蛍光蛋白質酸化ストレス

项目摘要

酸化ストレスによりヘムオキシゲナーゼ-1(HO-1)が強く誘導される。このHO-1の誘導は細胞保護に重要な役割を担っており,HO-1遺伝子導入により虚血再灌流時の細胞障害が軽減されることも報告されている。転写因子Bach1はHO-1遺伝子の抑制因子であることを発見した(EMBO J.2002,Sun et al.)。このような知見から,もしも薬剤でBach1を阻害することができれば,HO-1の発現を高く誘導し,細胞保護を達成することができると考えられる。そこで本研究は,Bach1活性を生きた細胞の中でモニターするシステムを構築し,様々なHO-1誘導条件下でその活性が低下することを検証することを目指した。さらに,このシステムを予備的なスクリーニング系に供し,ランダムスクリーニングのための最適化も試みることとした。1.リポーター細胞株の樹立HO-1リポーター遺伝子を線維芽細胞へ導入し,染色体上に安定に遺伝子導入されたリポーター細胞株を樹立した。さらに,これら細胞株でもHO-1誘導剤に応答してリポータールシフェラーゼ活性が変動することを確認した。また,ヘム応答性核排出リポーターを作製した。2.予備的スクリーニングの実施前年度までに確立したクロマチン免疫沈降法および一過性リポーターシステムを用いて,共同研究を実施している製薬企業から供与された薬剤候補の効果を検討した。そして,いずれも薬剤作用の検出に利用できることを確認した。しかし,ランダムスクリーニングを行うためにはアッセイ当たり所要時間や費用の点に問題があると判断された。3.新規アッセイシステムの構築Bach1の阻害蛋白質としてIHABPを同定し,その相互作用が薬剤の標的となる可能性を示した。

The acid change in the form of the acid change. HO-1 gene induction plays an important role in cell protection. HO-1 gene induction reduces cell damage during reperfusion. The expression factor Bach1 is an inhibitor of HO-1 gene (EMBO J.2002,Sun et al.). The cell protection is achieved by the high induction of HO-1 and the inhibition of Bach-1. In this study,Bach1 activity was induced in cells and cell culture was constructed to demonstrate the decrease of Bach 1 activity under HO-1 induced conditions. In this case, the system is prepared for the optimization of the system. 1. Establishment of HO-1 hybrid cell line, chromosome stable hybrid cell line In this case, the HO-1 induction factor was confirmed. In addition to the above, it is also possible to control the internal combustion engine. 2. In the year before the implementation of the preparation, the immuno-sedimentation method and the transient immuno-sedimentation method were established, and the results of the preparation and implementation of the preparation and preparation candidates were discussed together. In addition to the above, the use of the Chinese medicine in the detection of the role of the Chinese medicine is confirmed. The time and cost of the project were determined. 3. The possibility of constructing a Bach1 inhibitor protein and IHABP by the new protocol was demonstrated.