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非メバロン酸経路特異的阻害物質に関する研究

非甲羟戊酸途径特异性抑制剂的研究

基本信息

批准号：
13760082
负责人：
葛山智久
金额：
$ 1.6万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトを含む動物はイソプレンユニットの生合成のためにメバロン酸経路を利用し、病原菌を含む多くの真正細菌、高等植物の色素体やマラリア原虫は、非メバロン酸経路を利用する。従って、非メバロン酸経路の特異的阻害剤は、副作用の無い理想的な抗菌剤、除草剤、抗マラリア剤のリード化合物になり得ると考えられる。本研究では、イソプレンユニットの新しい生合成経路である非メバロン酸経路をターゲットとした抗菌剤、除草剤および抗マラリア剤のリード化合物となりうる物質を、微生物の代謝産物を中心に広く天然有機化合物に求める。初年度には、放線菌からクローニングしたメバロン酸経路の遺伝子群を枯草菌に導入し、非メバロン酸経路の唯一の特異的阻害剤であるホスミドマイシン存在下でもメバロン酸を添加すれば生育することができる枯草菌の形質転換株を作成することに成功した。これを受けて、実際に、本形質転換株を使用した非メバロン酸経路特異的阻害剤のスクリーニング系を開発し、抗菌剤などのリード化合物となりうる物質のスクリーニングを開始した。放線菌培養物を中心に約1万株の培養物を本スクリーニング系で評価した結果、放線菌KU82株に非メバロン酸経路に特異的な阻害活性を見出した。その活性物質の単離には至っていないが、現在の状況を説明する。KU82株の菌体アセトン抽出物を濃縮後、HP-20カラムに吸着させ、30%メタノールで活性画分を溶出した。この活性画分を濃縮後、水相を酢酸エチルで抽出し濃縮乾固物を50%メタノールに溶解し、50%メタノールで置換したオープンのODSカラムに添着した。次に、活性画分を60%メタノールで溶出し、現在、高速液体クロマトグラフィーで精製中である。精製途中の活性画分を集め、in vitroで非メバロン酸経路のどの段階を阻害しているから検討した結果、1-デオキシキシルロースリン酸レダクトイソメラーゼを阻害していることが判明した。

The pathogens contain multiple, real bacteria, higher plants, pigments, protozoa, and non-pigmentosomes. The toxicity and side effects of antibacterials, herbicides, antiseptics, antiseptics, and antiseptic compounds were tested. The purpose of this study is to develop a new method of synthesis. In this study, the synthesis of natural organic compounds was detected in the center of microbial products, microbial agents and biochemicals. At the beginning of the year, the bacteria, acid, acid, growth, growth, The anti-bacterial, anti-bacterial, anti-bacterial and anti-bacterial compounds are used to prevent the use of anti-bacterial compounds. About 10, 000 strains of bacteria were cultured in the center of the culture center. The results of the experiment and the inhibition activity of the strain KU82 were tested. The active substances have been isolated from the air to the air, and now they are in a state of health. After the bacteria of KU82 strain were extracted from the bacteria, the extract was absorbed by HP-20 bacteria, and the bioactivity of 30% bacteria was extracted by bioassay. After the active painting is divided into several parts, the water phase is divided into several parts, and the water phase is divided into two parts: 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50% and 50%, respectively. The second and active painting is divided into 60% and 60%, and the current and high-speed liquid is in high speed. On the way to the precision, the active painting collection was collected, the in vitro was used to prevent the pain in the road, and the results were obtained in the middle of the road. the results, the results and the results were analyzed.