小児膠原病患者における自己抗体対応抗原タンパク質の網羅的解析

儿童胶原病患者自身抗体对应抗原蛋白的综合分析

• 批准号: 15790535
• 负责人: 今川 智之
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790535/
• 关键词: 小児リウマチ性疾患; 2次元電気泳動; 自己抗体; プロテオミクス; 小児; 二次元電気泳動; 質量分析

小児膠原病患者における自己抗体対応抗原タンパク質の解析平成15年度に引き続き、HEP2細胞の培養を行い、細胞成分の抽出と核蛋白成分の抽出と患者血清を用いた自己抗体対応抗原蛋白質の解析に従事した。・まずHEP2細胞の培養後、核蛋白成分と細胞質成分に分離し、それぞれの蛋白成分を2次元電気泳動し蛋白のスポット展開を行った。HEP2細胞の培養ロット間でのスポットの出現を比較したところ、ロットによりスポットの発現に差異が認められた。このため同一ロットを用いて、全身性エリテマトーデス患者血清の分析を行った。患者血清でのスポット検出が、少検体量のため明らかなスポット同定ができなかった。・次に患者血清からIgG分画とアルブミンをIgGアルブミン除去カラムを用いて除去し、を2次元電気泳動を行い、疾患に特異的な蛋白スポットの同定を行った。患者血清を疾患発症期と回復期の2点で比較を行った。川崎病患者血清を用いて検討を行った。患者血清からIgG分画とアルブミン分画を除去した後、Cy5とCy3の蛍光色素で標識を行い2次元泳動を行った。その後、各スポットの蛍光を蛍光スキャナを用いて検出し、急性期と回復期での比較を行った。その結果、急性期に特異的な蛋白スポット171個を検出した。スポットはそれぞれアポリポ蛋白、急性反応蛋白、補体であった。しかし、蛋白を同定できないスポットが40個認められた。これらの結果から川崎病の炎症に特異的なスポットの存在が明らかとなった。今後も同研究で得られた未知のスポットの解析を継続して行っていくこととし、現段階までの成果を論文としてまとめ海外雑誌に投稿する準備をしている。また、今後、その他の小児リウマチ性疾患についても同様の手法を用いて行っていきたい。

Small where collagen disease に お け る their antigen of antibody 応 seaborne タ ン パ ク qualitative analytical pp.47-53 の 15 year に lead き 続 き, HEP2 cells の を line い, composition の spare と nucleoprotein composition の out と patients serum を い た their antibody 応 seaborne antigen protein の parsing に 従 matter し た. · ま ず の HEP2 cells after incubation, nucleoprotein composition と cytoplasm components に separation し, そ れ ぞ れ の protein composition を 2 yuan electric 気 swimming し protein の ス ポ ッ ト line launched を っ た. Between の HEP2 cells develop ロ ッ ト で の ス ポ ッ ト の appear を compare し た と こ ろ, ロ ッ ト に よ り ス ポ ッ ト の 発 に difference が now recognize め ら れ た. <s:1> ため ため was used in conjunction with ロットを to analyze を and った the serum of patients with <s:1> て and systemic エリテ ト ト デス デス デス デス デス デス デス デス デス. Patients with serum で の ス ポ ッ ト 検 が, less 検 dimension の た め Ming ら か な ス ポ ッ ト with fixed が で き な か っ た. , time に patients serum か ら IgG points draw と ア ル ブ ミ ン を IgG ア ル ブ ミ ン remove カ ラ ム を with い て remove し, 2 dimensional を に electric line 気 swimming を い, disease specific protein な ス ポ ッ ト の with fixed line を っ た. The patient 's serum を disease onset stage と recovery stage <s:1> two points で comparison を line った. Serum of patients with kawasaki disease を use を て検 to obtain を line った. Patients serum か ら IgG points draw と ア ル ブ ミ ン points draw を remove し た, Cy5 と Cy3 の 蛍 photopigment で identify lines を い 2 yuan swimming を っ た. After そ の, various ス ポ ッ ト の 蛍 light を 蛍 light ス キ ャ ナ を with い て 検 し, acute phase と reply で の is line を っ た. Youdaoplaceholder0 そ results, に specific な proteins in the acute phase スポット171 を検 out of た た. Youdaoplaceholder0 スポット それぞれアポリポ それぞれアポリポ protein, acute anti応 protein, complement であった. <s:1> スポットが で, protein を, で な な スポットが スポットが40 identifications められた. The results of the れら れら result of the ら kawasaki disease <s:1> inflammation に specific なスポット となった present が light ら となった となった. も with research で too in the future ら れ た unknown の ス ポ ッ ト の parsing を 継 続 し て line っ て い く こ と と し, now Duan Jie ま で result を の と し て ま と め 雑 overseas volunteers contribute に す る prepare を し て い る. ま た, in the future, そ の small where he の リ ウ マ チ disorder に つ い て も with others の gimmick を with い て line っ て い き た い.