酸化ストレス防御と寿命に関係する遺伝子の同定

鉴定与氧化应激保护和寿命相关的基因

• 批准号: 17780084
• 负责人: 藤井 道彦
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17780084/
• 关键词: 老化; 活性酵素; 線虫; 出芽酵母; 活性酸素

酸素は生命活動に必須であるが、代謝の過程で、反応性の高い活性酸素種(O_2^-、H_2O_2、・OH等)を生成する。そして、それらが生体分子を攻撃し、老化など、種々の生命機能の劣化を引き起こす。活性酸素の消去に関わる遺伝子としては、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ等が知られているが、実際の活性酸素の発生/消去機構は複雑で、詳細は明らかになっていない。そこで、それらに関与する遺伝子を明らかにするために、線虫Caenorhabditis elgansや、酵母Saccha romyces cerevisiaeを用いて、様々な活性酸素感受性変異体を単離し、酸化ストレスと寿命の解析を行った。線虫変異体oxy-4は、高濃度酸素下(60-90%酸素)で生育出来ず、活性酸素放出剤であるパラコートに対しても高い感受性を示す。寿命は野性型よりも短い。この変異体を詳細に解析し、oxy-4遺伝子を3番染色体上の非常に狭い領域にマップした。そこで、その領域に存在するDNAを、マイクロインジェクション法により変異体に導入したところ、1種類のDNAクローンが活性酸素感受性をほぼ完全に相補することを見いだした。しかし、このDNAを断片化し作成したコンストラクトは、十分な相補活性を示さなかった。さらに複数のコンストラクトを作成し実験を行ったが、領域を狭める事は出来なかった。そこで、領域内の遺伝子内にフレームシフト変異を導入し、原因遺伝子の同定を行い、原因遺伝子を同定する事に成功した。酵母に酸化ストレス耐性を付与出来る遺伝子として3種類の酵母遺伝子を単離した。SODやカタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ等の発現を調べたが、発現の上昇は観察されなかったので、本年は、上記抗酸化酵素の遺伝子を欠損させた株を作成し、これら遺伝子が、抗酸化酵素欠損株のバックグラウンドでも酸化ストレス耐性化能を示すか調べた。

Acid is necessary for life activities, it is a metabolic process, and highly reactive acid species (O_2^-, H_2O_2, ・OH, etc.) are generated.そして、それらがbiotic moleculesをattackし、agingなど、kind々のdegradation of life functionsをinducingきこす. Activated acid element removerキシドジスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼが知られているが, 実记のactivated acid element’s generation/elimination mechanism は曑で, detailed は明らかになっていない.そこで, それらに关与する伝子を明らかにするために, nematode Caenorhabditis elgansや, yeast Saccha romyces cerevisiae を Use いて, 様々なActivated acid sensitive allogeneic body を単し, acidification ストレスとLife のANALYSIS を行った. The nematode allogeneic oxy-4 is produced under a high concentration of acid (60-90% acid), and the active acid released is a high sensitivity. Lifespan is shorter than that of the wild type. Detailed analysis of allogeneic abnormalities, oxy-4 genetic mutation, and a very narrow field on the 3rd chromosome.そこで、その地にexistingするDNAを、マイクロインジェクション法により変variantにImportしたところ, 1 type of DNA クローンが active acid sensitivity をほぼcomplete complement することを见いだした.しかし, このDNA をFragmentation したコンストラクトは, 10% complementary active を Show さなかった. The plural of さらにのコンストラクトを成し実験を行ったが, the domain of narrow める事は出なかった.そこで, within the field の伝子内にフレームシフト変different を Introduction し, cause remaining 伝子の同定を行い, caucus left 伝子を同定する事に成した. Yeast is acidified, and it is resistant to acidification. It is a yeast that has 3 types of acidified yeast and is given out. SODやカタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼetc.べたが, 発appearのriseは観看されなかったので, this year's は, Shang Ji's anti-acid fermentation Su no yen zi を owed damage さ せ た strain を made し, こ れ ら 伝子 が, anti-acidification enzyme owed Damage to the strain's のバックグラウンドでもacidified ストレス resistance chemical energy をshow すか Adjustment べた.

项目成果

G-protein gamma subunit GNG11 strongly regulates cellular senescence.

• 发表时间: 2006
• 期刊: Biochemical and biophysical research communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: M. Hossain;Risa Sakemura;M. Fujii;D. Ayusawa

5-Bromodeoxyuridine Increases Transient Expression of Ectopic Genes in Human Cells

5-溴脱氧尿苷增加人类细胞中异位基因的瞬时表达

• 发表时间: 2007
• 期刊: Biosci Biotechnol Biochem. 71
• 作者: Endoh;M.;Miki;K.;Hossain;M.N.;Fujii;M.;Ayusawa;D.
• 通讯作者: D.

Prolonged unbalanced growth induces cellular senescence markers linked with mechano transduction in normal and tumor cells.

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2005.07.106
• 发表时间: 2005-09
• 期刊: Biochemical and biophysical research communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Emi Sumikawa;Y. Matsumoto;Risa Sakemura;M. Fujii;D. Ayusawa

Expression of RAB27B is up-regulated in senescent human cells

• DOI: 10.1016/j.mad.2006.03.001
• 发表时间: 2006-07-01
• 期刊: MECHANISMS OF AGEING AND DEVELOPMENT
• 影响因子: 5.3
• 作者: Fujii, Michihiko;Kawai, Yoshinori;Ayusawa, Dai
• 通讯作者: Ayusawa, Dai

Early BrdU-responsive genes constitute a novel class of senescence-associated genes in human cells

• DOI: 10.1016/j.yexcr.2004.10.036
• 发表时间: 2005-04-01
• 期刊: EXPERIMENTAL CELL RESEARCH
• 影响因子: 3.7
• 作者: Minagawa, S;Nakabayashi, K;Ayusawa, D
• 通讯作者: Ayusawa, D