低酸素性肺血管収縮におけるカルシウム依存性、非依存性収縮の機序解明

阐明缺氧肺血管收缩中钙依赖性和非钙依赖性收缩的机制

• 批准号: 18890155
• 负责人: 水野 祐介
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890155/
• 关键词: 低酸素性肺血管収縮; シグナル伝達; カルシウム; Rho-kinase; siRNA

平成18年度に引き続きラット肺動脈リング標本を低酸素に暴露させ低酸素性肺血管収縮(HPV)における張力及び平滑筋細胞内カルシウム濃度測定を行った。HPVは初期に比較的急峻な収縮を示し、一端弛緩した後緩徐に収縮する2相性の収縮を示した。一方、カルシウム濃度は初期の収縮において張力とほぼ一致した上昇を呈するが、その後の変化は少なかった。現在、再現性を確認している。今後、フリーラジカルも同様の実験手法で測定予定である。HPVにおける張力とカルシウム濃度の推移の差異より、緩徐な収縮相はカルシウム非依存性の収縮機序が関与していると推測される。HPV惹起中のMYPT1,CPI-17リン酸化状態を経時的に測定し、MYPT1のリン酸化は緩徐な収縮相において増加傾向を認めたが、十分な実験数を得るため引き続き行っている。MYPT1,CPI-17,MLCKのHPVにおける役割を検討するためin vivoでRNAiを検討していたが、十分なKnockdownが得られず、現在は薬理学的検討を行っている。In vivoにおけるRNAiは様々な方法が考案されているが、近年エレクトロポレーションによってplasmidをin vivoで発現させる効率が高まった。そこでshRNA発現またはdominant negative変異体タンパクを発現させるplasmidを用いる方法を検討している。大腿筋内でplasmidによるタンパクを発現させる方法は当教室で確立されており、肺における条件を検討している。

In 2018, we conducted a series of tests to determine the intracellular concentration of HPV and its related factors. HPV has a two-phase contraction pattern that is characterized by rapid contraction at the initial stage, relaxation at one end, and slow contraction at the later stage. The concentration of a substance decreases in the initial stage and increases in the later stage. Now, reproducibility is confirmed. In the future, the same method of implementation will be determined. The difference between HPV stress and its concentration, slow contraction and independent contraction mechanism is related to the hypothesis. MYPT1,CPI-17, HPV activation, acidification, aging, and increase in MYPT1, CPI-17 activity. MYPT1,CPI-17,MLCK HPV gene detection in vivo RNAi detection in vivo, ten Knockdown detection in vivo, present biological detection in vivo. In vivo, RNAi methods have been developed with high efficiency in recent years. The method of shRNA development is discussed in the following way: dominant negative variant The method of developing the plasmid in the thigh tendon is to establish the conditions for the development of the plasmid in the thigh tendon.