乳児重症ミオクロニーてんかんにおける変異イオンチャネル蓄積病態の実証

婴儿严重肌阵挛性癫痫突变离子通道积累病理学的论证

• 批准号: 19659272
• 负责人: 廣瀬 伸一
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Fukuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19659272/
• 关键词: チャネル; 受容体; てんかん; 中枢神経; 遺伝子

乳児重症ミオクロニーてんかん(SMEI)などの重症てんかんに変異イオンチャネル蓄積病態が関係していることを以下方法であきらかにした。まず、細胞生物学的に変異GABA_A受容体やNa+チャネルの細胞局在、小胞体(ER)輸送障害とERストレス・アポトーシスを検証した。ラットGABRG2に蛍光蛋白標識し、ヒトSMEIの変異とGEFS+の変異を導入し、培養細胞上に発現させ、α1β 2γ2よりなる5量体のGABA_A受容体を再構成させた。この細胞を用いて変異GABA_A受容体標識蛍光蛋白を指標に、免疫染色とともに蛍光顕微鏡を用いる方法、共焦点レーザー顕微鏡による方法、さらに、GABAA受容体にある糖鎖を利用しパルスチェイスにてその細胞内局在を調査した。これらの実験により変異を導入したGABA_A受容体のオルガネラ局在が小胞体であることが明らかになった。この細胞を用いてERストレスによる小胞体やアポトーシス関連分子の同定を行った。今回はカスパーゼ、DNAフラグメンテーション、アネキシンV、抗PARP等の複数の指標の応用によりアポトーシスの証明を行った。これによりGABAA受容体を発現させた、培養細胞での変異アポトーシスが実証された。さらに分子病態をin vivoで明らかにするため、ヒトてんかんで発見された遺伝子変異と相同変異を持つ動物の作出を試みた。このためヒトと同じ遺伝子異常を持つモデル動物をすでに実績のあるPDGFプロモーターを用いた組換え法により遺伝子組換えラットで作成した。今回はヒト家族性特発性てんかん(常染色体優性夜間前頭葉てんかん)と同じ遺伝子異常をCHRNA4遺伝子に持つ遺伝子組換えラットを作出することに成功した。(特許取得済、J.Neuroscience 2008)

Breast serious disease ミオクロニーてんかん(SMEI)などの Severe disease てんかんに変differentイオンチャネル accumulates morbid relationship していることをThe following method であきらかにした.まず、The different GABA_A acceptor of cell biology is Na + チャネルの Cell localization, small cell body (ER) transport obstacle とERストレス・アポトーシスを検证した.ラットGABRG2 is a photoprotein marker, ヒトSMEI is not the same as GEFS+ is introduced, and is present in cultured cells, α1β 2γ2よりなる5-dimensional GABA_A receptor is reconstituted. The cells were labeled with GABA_A receptors and used as indicators, and immunostaining was performed using light microscopy, and the confocal method was used. The microscopic microscopic method, GABAA receptor sugar locking method and the use of GABAA receptors are used to investigate the internal structure of cells.これらの実験により変different をIntroducing したGABA_A receptor のオルガネラ in the small cell body であることが明らかになった.このCell を Use いてER ストレスによるsmall cell body やアポトーシスassociated molecule の Same determination を row った. This time はカスパーゼ,DNAフラグメンテーション,アネキシンV,anti PARP and other complex indicators are proven by the use of PARP and other indicators. The GABAA acceptor is present and the cultured cells are different.さらにmolecule pathological diseaseをin vivoで明らかにするため、ヒトてんかんで発见された缝子変differentと Same変differentをholdつanimalのmakingをtrialみた. The same PD GF プロモーターを uses the いた group to replace the え法により缝子组 replaced with えラットで to make した. This time, familial idiopathic idiopathic idiopathic idiosyncratic syndrome (autosomal dominant nocturnal frontal leaf lobes) is the same as the remaining one The sub-abnormal CHRNA4 legacy has been successfully replaced by CHRNA4. (Licensed by J. Neuroscience 2008)

项目成果

変異導入遺伝子およびそれを導入したノックイン非ヒト動物

引入突变转基因和敲入非人类动物

• 发表时间: 2008

Mutation screening of AP3M2 in Japanese epilepsy patients

• DOI: 10.1016/j.braindev.2006.12.004
• 发表时间: 2007-09-01
• 期刊: BRAIN & DEVELOPMENT
• 影响因子: 1.7
• 作者: Huang, Ming-Chih;Okada, Motohiro;Kojima, Toshio
• 通讯作者: Kojima, Toshio

Mutational analysis for repetitive febrile seizures and sporadic febrile seizures plus in Japanese

日本人反复性热性惊厥和散发性热性惊厥的突变分析

• 发表时间: 2008
• 作者: 今村剛;清原裕;Hirose s.
• 通讯作者: Hirose s.

Novel de novo splice-site mutation of SCN1A in a patient with partial epilepsy with febrile seizures plus

• DOI: 10.1016/j.braindev.2008.06.001
• 发表时间: 2009-02-01
• 期刊: BRAIN & DEVELOPMENT
• 影响因子: 1.7
• 作者: Kumakura, Akira;Ito, Masatoshi;Hirose, Shinichi
• 通讯作者: Hirose, Shinichi

Physicochemical property changes of amino acid residues that accompany missense mutations in SCNIA affect epilepsy phenotype severity

SCNIA 错义突变伴随的氨基酸残基的理化性质变化影响癫痫表型的严重程度

• 发表时间: 2009
• 期刊: J Med Genet 46(10)
• 作者: Hirose S.;et al.
• 通讯作者: et al.