哺乳動物リバースジェネティクス法を用いたてんかんの候補遺伝子の同定

利用哺乳动物反向遗传学鉴定癫痫候选基因

• 批准号: 14658263
• 负责人: 廣瀬 伸一
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Fukuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14658263/
• 关键词: チャネル; 受容体; トランスジェニックマウス; 実験動物; トランスジェニック

ラットnAChRのα4サブユニット遺伝子Chrna4のcDNAをPCRクローニング法により調整した。続いてヒトのSer284Leu変異の相同変異であるSer284Leu(c.856T> C : c.857C>T)変異をラットChrna4のcDNA (L31620)に導入した。既報のとおり、変異cDNAを用いて、変異ラットnAChRの電気的特性を野生型のそれと比較し、変異α4サブユニットを持つnAChRは野生型のそれに比べ、desensitizationがより急峻になることを確認した。作成した変異cDNAをPDGFプロモーターを持つベクターに移入した後、定法どおりラット受精卵に顕微注入した。仮親の卵管内への移植により、組換体を作出した。組換え遺伝子はラット尾より抽出したゲノムDNAを直接シーククエンスし確認した。組換え遺伝子の発現は、各組織より抽出したトータルRNAを用いたリアルタイムRT-PCRにより評価した。遺伝子組換えラットを2系統得て、うち一系統(S284L-TG)をその後の繁殖および実験に用いた。S284L-TGの妊孕力は野性型のラットと変わらず、出生個体数も変化なかった。また出生仔中の組換え体数もメンデルの法則に矛盾しなかった。S284L-TGでは、c.856T>C:c.857C>T変異を持つmRNAの発現が中枢神経と筋肉を中心に確認された。S284L-TG睡眠中の脳波で頻回の発作波の出現がみとめられた。これに一致し、ADNFLEの発作のひとつであるparoxysmal arousal発作を1日200回程度認めた。また時に一部全般化するmotor attackも認めた。しかしながら、筋力、協調運動,自発運動量、痛み感受性は組換体と組換体の間で差異は認められなかった。さらに、ペンテトラゾール誘発けいれんも、発現までの潜時、さらにけいれんの持続時間に組換体と同胞非組換体の間で変化はなかった。

The cDNA of Chrna4 was modified by PCR. Ser 284 Leu(c.856T> C : c.857C>T) was introduced into the cDNA of Chrna4 (L31620). The electrical properties of NAChR are reported to be different from wild type, different from wild type, different from wild To create a cDNA library, we need to maintain a database for the transfer of cDNA to the fertilized egg. Transplantation of the parent's oocyte into the oocyte tube was performed. The DNA of the group was extracted and confirmed directly. The expression of DNA was evaluated by RT-PCR. The sub-group is changed to the 2 system, and the 1 system (S284L-TG) is changed to the 3 system. S284L-TG pregnancy force is wild type, birth number is different. There are contradictions in the rules of the birth of children. S284L-TG is a protein that is expressed in the central nervous system and identified in the muscle center. S284L-TG sleep in the frequency of the wave and the occurrence of the wave This is the same as ADNFLE's development. It's a paroxysmal arousal development. It's 200 times a day. A complete motor attack is required. The difference between the body and the body is recognized by the difference between the body and the body In addition, the time of occurrence, the time of persistence, the time of transformation and the time of non-transformation of siblings are changed.

项目成果

Matsushima N., et al.: "Mutation (Ser284Leu) of neuronal nicotinic acetylcholine receptor α4 subunit associated with frontal lobe epilepsy causes faster desensitization of the rat receptor expressed in oocyte"Epilepsy Res. 48. 181-186 (2002)

Matsushima N. 等人：“与额叶癫痫相关的神经元烟碱乙酰胆碱受体 α4 亚基的突变 (Ser284Leu) 导致卵母细胞中表达的大鼠受体更快脱敏”Epilepsy Res. 48. 181-186 (2002)

Seven Myoclonic Epilepsy in Infants - Clinical analysis and relation to SCN1A mutations -

七种婴儿肌阵挛性癫痫 - 临床分析及其与 SCN1A 突变的关系 -

• 发表时间: 2005
• 期刊: Adv Nerol 95
• 作者: Oguni H.;et al.
• 通讯作者: et al.

Determination of exocytosis mechsnisms of DOPA in rat striatum using in vivo microdialysis.

使用体内微透析测定大鼠纹状体中多巴的胞吐机制。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Neurosci Lett 367
• 作者: Gang Zhu.;et al.
• 通讯作者: et al.

Kaneko S., et al.: "Genetics of epilepsy : current status and perspectives"Neurosci Res. 44. 11-30 (2002)

Kaneko S. 等人：“癫痫遗传学：现状和观点”Neurosci Res。

Hirose S., et al.: "X-Linked mental retardation and epilepsy : Pathogenetic significance of ARX mutations"Brain Dev. (in press). (2003)

Hirose S. 等人：“X 连锁智力低下和癫痫：ARX 突变的病理遗传学意义”Brain Dev。