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精子形成の試験管内誘導

体外诱导精子发生

基本信息

批准号：
20659027
负责人：
篠原隆司
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は精子幹細胞の分化糸を確立することである。本年度、我々は器官培養されたマウス精巣内に精子幹細胞を移植し、その分化能力の検定を行なった。半数体のマーカー分子としてacrosin Promoter下にenhanced green fluorescence Protein(EGFP)を発現するマウスから樹立したGermline stem(GS)細胞を先天的に不妊であるWBB6F1-W/Wvマウスの精巣内に移植を行なった。移植後数時間以内に精巣をピンセットで断片化し、alpha MEM培地を用いてアガロースゲル上で34度で器官培養を行なった。移植後にacrosinの発現をEGFPでUVランプ照射下においてモニターしたところ、移植後3-4週間でEGFP陽性細胞の存在が確認された。この細胞が精子形成細胞として正常に子孫を作製する能力があるか否かを調べるために、この断片から生殖細胞を回収し、その細胞を用いて顕微授精を行なった。二度にわたり異なる精巣を用いて実験をおこなったが、いずれの場合も作製された胚は子宮に着床後に死亡しており、正常な子孫を得ることが出来なかった。しかしながら、この結果は、精子幹細胞が試験管内で半数体細胞へと分化することを示すものであり、この培養系を改善することにより、より効率よく半数体細胞を得ることができると予想される。現在、我々は異なる培養系を用いてGS細胞の半数体細胞への分化能の検討を行っている。

The aim of this study was to establish the differentiation of sperm stem cells. This year, we will continue to establish sperm stem cell transplantation and differentiation capacity in organ culture. The expression of enhanced green fluorescence Protein(EGFP) under acrosin Promoter was detected in WBB6 F1-W/Wv cells. Within a few days after transplantation, the sperm was harvested, and the alpha MEM culture was used to culture the organs at 34 degrees. EGFP positive cells were identified 3-4 weeks after transplantation. These cells are capable of producing sperm, and they are capable of producing sperm. The second time, the embryo died after implantation, and the normal offspring were born. The results show that half of the somatic cells in the sperm stem cells are differentiated, and half of the somatic cells in the culture lines are improved. Now, we have been studying the differentiation ability of half somatic cells of GS cells in different culture lines.