Identification of novel defense factors using Luciferase expressing Listeria by RNAi screening.
通过 RNAi 筛选,使用表达李斯特菌的荧光素酶鉴定新型防御因子。
基本信息
- 批准号:21780088
- 负责人:
- 金额:$ 2.91万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
- 财政年份:2009
- 资助国家:日本
- 起止时间:2009 至 2010
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
Innate immune system is one of the first-line defense system that is highly conserved from plants, insects and mammals. Peptidoglycan recognition protein (PGRP)-LE firstly identified in our laboratory is functioning on both intracellular and extracellular space and responsible for the activation of one of the innate immune signaling pathway, Imd pathway, and melanin synthesis pathway. Furthermore, PGRP-LE plays a crucial role to eliminate intracellular pathogens using one of the general protein degradation system called "Autophagy", which is independent on the Toll and Imd pathway. Therefore, to identify further novel host defense factors invoved in this multi-functional PGRP-LE, I set up the system where the growth of Listeria can be monitored by constitutive Luciferase expressing Listeria strains. Using this Listeria strain, the infection condition where we can see the effect of PGRP-LE was scrutinized. As an alternative strategy, I also conducted DNA microarray and identified a novel antimicrobial-like peptide named Listericin. Further analysis of Listericin using protein purification, RNAi and overexpression studies demonstrated that the expression of Listericin is cooperatively regulated by both PGRP-LE and the JAK-STAT pathway, as a secreted form, it exibits bacteriocidal activities against gram-negative bacteria and Listeria strain. Furthermore, in vivo approach using Listericin overexpressing transgenic flies showed that they exhibit resistance against Listeria infection in the surival test. Taken together with these results, we can show that Listericin is a novel antimicrobial peptide on Drosophila innate immune response.
先天免疫系统是植物、昆虫和哺乳动物高度保守的一线防御系统之一。本实验室首次鉴定的肽聚糖识别蛋白(PGRP)-LE在细胞内和细胞外空间发挥作用,负责激活先天免疫信号通路、Imd通路和黑色素合成通路之一。此外,PGRP-LE 在利用一种称为“自噬”的通用蛋白质降解系统消除细胞内病原体方面发挥着至关重要的作用,该系统独立于 Toll 和 Imd 途径。因此,为了进一步鉴定这种多功能 PGRP-LE 中涉及的新型宿主防御因子,我建立了一个系统,可以通过表达荧光素酶的李斯特菌菌株来监测李斯特菌的生长。使用该李斯特菌菌株,我们可以观察到 PGRP-LE 效果的感染状况。作为替代策略,我还进行了 DNA 微阵列分析,并鉴定出一种新型抗菌肽,名为李斯特菌素 (Listericin)。利用蛋白质纯化、RNAi和过表达研究对李斯特菌素进行进一步分析表明,李斯特菌素的表达受到PGRP-LE和JAK-STAT途径的协同调节,作为分泌形式,它对革兰氏阴性菌和李斯特菌菌株具有杀菌活性。此外,使用李斯特菌素过表达转基因果蝇的体内方法表明,它们在生存测试中表现出对李斯特菌感染的抵抗力。综合这些结果,我们可以证明李斯特菌素是一种针对果蝇先天免疫反应的新型抗菌肽。
项目成果
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专著数量(0)
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会议论文数量(0)
专利数量(0)
Cooperative regulation of the induction of the novel antibacterial Listericin by PGRP-LE and JAK-STAY pathway
PGRP-LE 和 JAK-STAY 通路协同调控新型抗菌李斯特菌素的诱导
- DOI:
- 发表时间:2010
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Akira Goto;Shoichiro Kurata
- 通讯作者:Shoichiro Kurata
Cooperative regulation of the induction of the novel antibacterial Listericin by PGRP-LE and JAK-STAT pathway.
PGRP-LE 和 JAK-STAT 途径协同调节新型抗菌李斯特菌素的诱导。
- DOI:
- 发表时间:2010
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Goto;A.;Kurata;S.
- 通讯作者:S.
Novel Drosophila antimicrobial peptide-like gene Listericin regulated by JAK-STAT pathway has bacteriocidal activities against gram-negative bacteria
JAK-STAT通路调控的新型果蝇抗菌肽样基因李斯特菌素对革兰氏阴性菌具有杀菌活性
- DOI:
- 发表时间:2009
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Akira Goto;Tamaki Yano;Jun Terashima;Shoichiro Kurata
- 通讯作者:Shoichiro Kurata
Novel roles of receptor-type Guanylyl Cyclase Gyc76C on Drosophila innate immune responses.
受体型鸟苷酸环化酶 Gyc76C 对果蝇先天免疫反应的新作用。
- DOI:
- 发表时间:2010
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Goto;A.;Iwashita;S.;Nabe;K.;Fukuzaki;M.;Oshima;Y.;Kurata;S.
- 通讯作者:S.
Cooperative regulation of the induction of the novel antibacterial Listericin by PGRP-LE and JAK-STAY pathway.
PGRP-LE 和 JAK-STAY 途径协同调节新型抗菌李斯特菌素的诱导。
- DOI:
- 发表时间:2010
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Akira Goto;Tamaki Yano;Jun Terashima;Shinzo Iwashita;Yoshiteru Oshima;Shoichiro Kurata.
- 通讯作者:Shoichiro Kurata.
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