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ウシ主要組織適合(MHC)クラスII分子の免疫機能と多型性の解析

牛主要组织相容性（MHC）II类分子的免疫功能和多态性分析

基本信息

批准号：
08660374
负责人：
間陽子
金额：
$ 1.6万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ウシMHC(BoLA)クラスII分子の免疫応答における役割をDNAレベルで解析すると同時に、牛白血病ウイルス(BLV)感染牛を用いて、BoLAクラスII遺伝子の多型性とウシの疾病に対する感受性との関連を分子レベルで解析する。以上により、ウシの生体防御機構を解明する突破口としたい。1)BoLAクラスII抗原の免疫応答における役割を明解にするため、cDNAクローニングを試み、6種類のBoLAクラスII遺伝子、DRA,DRB3,DQA1,DQA2,DQB1,DQB2のcDNAクローンの単離に成功した。2)各遺伝子の発現と機能について解析した。ウシ末梢血リンパ球における転写を確認するため、各遺伝子の第2エクソンを特異的に増幅可能なPCRプライマーを設計し、ウシリンパ球細胞株より抽出したmRNAを用いてRT-PCRを行った。また、α鎖及びβ鎖のcDNA(DRA/DRB3,DQA1/DQB1,DQA1/DQB2,DQA2/DQB1,DQA2/DQB2)を、COS-1及びマウスL細胞に導入し単クローン性抗体を用いて、発現、蛋白化学的性状及び混合リンパ球培養試験を行った。その結果、機能発現可能な遺伝子として、BoLA-DRA,DRB3,-DQA1,-DQB1,-DQA2,-DQB2を同定に成功した。3)BoLAクラスII遺伝子の多型と疾患感受性との相関を明らかにした。最も多型に富み機能的な蛋白質をコードするBoLA-DRB3遺伝子に着目し、BLV感染未発症牛、BLV感染リンパ球増多症牛および白血病発症牛のDRB3の第2エクソン267塩基対をPCR法により増幅後、塩基配列を決定した。β^<78>残基がTyrであるアリルをホモで有する個体は、BLVによる白血病発症に感受性であることが、一方、Lys/Arg-β71,Gln-β74,Val-β78のアミノ酸配列を有するアリルが、抵抗性である可能性を示唆された。このように、BLVによる白血病発症の感受性をBoLAクラスII遺伝子が規定している可能性が示唆された。

DNA sequencing of MHC(BoLA) gene II in immune response, bovine leukemia virus (BLV) infection in cattle, polymorphism of BoLA gene II and susceptibility to disease. The above-mentioned breakthroughs in biological defense mechanisms have been clarified. 1) The cDNA library of BoLA virus II antigen, DRA,DRB3,DQA1,DQA2,DQB1 and DQB2 was successfully isolated. 2)The function of each gene is to analyze it. The second part of each gene was amplified by PCR and was designed to extract mRNA from human peripheral blood cells. The cDNA for α-, α-, and β-locks (DRA/DRB3,DQA 1/DQB1,DQA1/DQB2,DQA 2/DQB1,DQA2/DQB2) was introduced into COS-1 and COS-1 cells, and the results were analyzed. The results and functions may be found in the following ways: BoLA-DRA,DRB3,-DQA1,-DQB1,-DQA2,-DQB2. 3) Polytype and disease susceptibility of BoLA CRIS II gene are closely related. The most polymorphic function-rich proteins were found in BoLA-DRB3 gene, BLV infected non-infected cattle, BLV infected multiple-infected cattle, and DRB3 in leukemia-developing cattle. PCR was used to determine the amplification and gene alignment of DRB3.β^<78>residues Tyr,Gln-β74,Val-β78 and the susceptibility to leukemia development in individuals with BLV have the possibility of Tyr,Gln-β74,Val-β78 and resistance. The susceptibility of leukemia to BLV is indicated by the possibility of leukemia development.