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哺乳類細胞を用いたオートファゴソーム形成機構の解析

利用哺乳动物细胞分析自噬体形成机制

基本信息

批准号：
21677002
负责人：
水島昇
金额：
$ 29.62万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (S)
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2013
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21677002/
关键词：
オートファジーオートファゴソーム小胞体 PI3キナーゼ ULK1 At14 Atg2 p62 Atg14

项目摘要

これまでに哺乳類オートファゴソーム形成に関わるAtg因子を多数同定してきた。そこで、本年度はそれらを5つのモジュールに分類してその遺伝学的階層構造を決定した。その結果、ULK1-Atg13-FIP200-Atg101複合体が小胞体の一部にまず局在化し、それに依存してクラスIIIPI3キナーゼ複合体であるAtg14-Beclin 1-Vps34-Vps15がリクルートされることが判明した。その下流では、PI3Pのエフェクターと考えられるDFCP1、WIPI-1、さらに膜伸長因子であると考えられるAtg12-Atg5-Atg16L複合体とLC3-PEがリクルートされる。さらに小胞体膜タンパク質であるVMP1の解析結果を踏まえて、オートファゴソーム形成部位は小胞体の微小ドメインであることを提唱した。さらにこれらの関連をもとにして、オートファジーの選択的基質であるp62がどのステップでオートファジー関連構造体にリクルートされるかを検討した。従来はp62がオートファゴソーム膜のLC3と直接結合することがその認識機構であると考えられてきたが、今回の解析からp62はLC3を含むほとんどのAtg因子に非依存的にオートファゴソーム形成部位に集積しうることが明らかとなった。さらに哺乳類Atg9もこの部位に一過的に集積することを見いだした。各因子の変異細胞の電子顕微鏡解析を含めながら、オートファゴソーム形成部位の超微形態学的・生化学的解析を進めている。

Most of the Atg factors involved in the formation of these mammalian genes are identical. This year, we will decide on the hierarchical structure of the five categories. As a result, the ULK1-Atg13-FIP200-Atg101 complex was identified as a part of the microcellular structure, and the ATg14-Beclin1-Vps34-Vps15 complex was identified as a part of the microcellular structure. The membrane elongation factor of DFCP1, WIPI-1, WIPI-1, W The analysis results of VMP1 in the microcellular membrane are presented in this paper. The relationship between the two groups is discussed in detail. The p62 is the direct binding mechanism of the LC3 and the Atg factor of the LC3. The p62 is the independent binding mechanism of the LC3 and the Atg factor of the LC3. The mammalian Atg9 is located in the middle of the body. The electron microscope analysis of different cells of each factor includes the ultramorphological and biochemical analysis of the formation site of each factor.