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オートファゴソーム・リソソーム融合の分子メカニズムの解析

自噬体-溶酶体融合的分子机制分析

基本信息

批准号：
15F15082
负责人：
水島昇
金额：
$ 0.77万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15F15082/
关键词：
オートファゴソームリソソーム

项目摘要

オートファジーは細胞質の一部をリソソームで分解するための進化的に保存された細胞機能である。細胞質を取り囲んだオートファゴソームとリソソームが融合することで分解が達成される。リソソームとオートファゴソームの融合にはSNAREタンパク質であるSyntaxin 17（STX17）、SNAP29、VAMP8、および繋留因子としてHOPS複合体が必要である（Jiang et al. Mol Biol Cell 2014）。STX17は完成されたオートファゴソームにのみ結合し、まだ閉鎖が終わっていない形成中間体には結合しない。また、STX17はオートファゴソームだけではなく、ミトコンドリアや小胞体にも局在する。しかし、飢餓時にはミトコンドリアや小胞体への局在は軽減し、オートファゴソームに効率よく集積する。そこで、オートファゴソームとリソソームの融合機構を明らかにする一端として、本研究では栄養飢餓依存的にSTX17が特異的にオートファゴソームへ局在できるメカニズムを明らかにすることを目指した。HeLa細胞、HEK293T細胞、マウス線維芽細胞にGFP融合したSTX17 cDNAをコードするレトロウイルス、あるいはプラスミドを用いて遺伝子導入し、ウェスタンブロット法および蛍光顕微鏡法によって解析した。オートファジーを誘導しうる飢餓によってSTX17はミトコンドリアや小胞体から離脱し、よりオートファゴソームに結合しやすくなる。そこで飢餓依存的にSTX17分子自体に変化が生じている可能性を考え、ウェスタンブロット法による解析を行った。その結果、飢餓によってGFP-STX17のバンドが一部上方にシフトすることが判明した。これは脱リン酸化酵素処理によって消失するため、STX17のリン酸化型であると考えられた。この修飾がSTX17の局在決定に関与する可能性が示唆された。

You need to make sure that you can use a computer to analyze the improved mechanical properties of the cell. The cell is divided into two parts, namely, fusion, fusion, decomposition and decomposition. We don't know what to do. We need to fuse SNARE. We need to fuse Syntaxin 17 (STX17), SNAP29, VAMP8, HOPS complex (Jiang et al. Mol Biol Cell 2014). The STX17 system completes the combination of the system and the system in the formation of the system. In the first place, there was a slight increase in the number of small cells in the body, so that the small cell body could not be found in STX17. At the same time, we should make sure that the small cell bodies are in good condition. In this way, the rate of cell growth is different. In this study, the information on one end of the STX17, which is dependent on each other, and the information provided by the integration mechanism, is clearly indicated in the integration mechanism. The HeLa cell, the HEK293T cell, the bud cell, the GFP fusion cell, the STX17 cDNA cell, the bud cell, the cell. This is the first time that the STX17 has been removed and that the small cell bodies have been removed. STX17 molecule autologous chemistry, chemical reaction, possibility test, chemical analysis, analysis and analysis. In the results of the test, you will be able to identify the error in the upper part of the GFP-STX17 movie. The acidified enzymes were removed, the acidified enzymes disappeared, the acidified enzymes disappeared, and the STX17 acidified enzymes were tested. The STX17 bureau is trying to decide whether it is possible or not.