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新規の植物育種のための植物人工染色体ベクターの作出

用于新植物育种的植物人工染色体载体的创建

基本信息

批准号：
11J07429
负责人：
和田直樹
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2013
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は、動植物両方で機能するシャトルベクターの作出をめざし、昨年度までに設定した条件での細胞融合により、シロイヌナズナ染色体のヒトHT1080細胞への導入を行った。その結果、植物染色体がヒト染色体へと転座した融合染色体を持つ細胞を獲得した。この細胞に対してFISH解析を行い、この転座染色体がヒト15番染色体長腕のテロメア部位に植物染色体が転座したものであり、両末端部にそれぞれの生物由来のセントロメア配列をもつことを明らかにした。また、長期培養を行うと、植物セントロメアのみをもつミニ染色体の出現が観察された。ミニ染色体の割合は培養2ヶ月目でピークを迎え、39.5%の細胞がミニ染色体を維持した。しかし、その後ミニ染色体を持つ細胞の割合は次第に低下した。一方で、反復配列が増幅した染色体組成をもつ染色体が現れ、その割合は4ヶ月目には28,3%にまで増加した。これらのミニ染色体、増幅型染色体は、共にヒトDNAを染色するhcot-1プローブでは全く染色されない。それぞれの染色体におけるhCENP-Aの局在を免疫染色により観察すると、転座染色体ではヒトセントロメアにのみシグナルが観察され、またヒトセントロメアをもたないミニ染色体上にもシグナルが観察された。これらの結果は、シロイヌナズナのセントロメアが長期培養により活性化し、二動原体状態となってミニ染色体が出現したことを示唆している。また、この融合細胞を用いてシロイヌナズナ遺伝子の網羅的遺伝子発現解析を行い、シロイヌナズナの遺伝子がヒト細胞においても発現していることを確認した。本年度までにシャトルベクターとしての有用性を示すことはできなかったが、シャトルベクターの基盤となる融合染色体を獲得することができた。また、今回新しく構築した細胞を用いて得られた新たな知見は、種の壁をこえたセントロメア、遺伝子発現機構の保存を示唆している。これらの結果は現在、投稿に向けて準備中である。

This year, the plant and animal function of the cell fusion, cell fusion, chromosome and introduction of HT1080 cells. As a result, plant chromosomes are fused into chromosomes. The chromosome of this locus is located in the middle of the cell FISH analysis, and the chromosome of this locus is located in the middle of the cell FISH analysis, and the chromosome of this locus is located in the middle of the cell FISH analysis. The appearance of chromosomes in plants after long-term cultivation is observed. 39.5% of the cells were maintained in the 2-month culture. The chromosome of the cell is divided into two parts: one part is lower than the other part. The number of chromosomes in a single row increased by 28.3% and the number of chromosomes in a single row increased by 28.3% The chromosome, amplitude-amplified chromosome, and co-chromosome DNA are stained with hot-1 and full-length DNA. The chromosome of hCENP-A was detected by immunostaining. As a result, the chromosome was activated and activated in long-term culture. The analysis of gene expression in fusion cells was carried out to confirm the gene expression in fusion cells This year, we have shown the usefulness of fusion chromosomes. The new structure of the cell is used to obtain new knowledge, seed wall, seed development mechanism and preservation. The result is now, the contribution is in preparation.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Localization of transgene-derived friabilins in rice endospermcells.

转基因衍生的 friabilins 在水稻胚乳细胞中的定位。

DOI：
发表时间：
2014
期刊：
Plant Biotechnology
影响因子：
1.6
作者：
M. Fujiwara;G. Suzuki;D. Kudo;H. Oba;Y. Wada;H. Wada;N. Wada;S. Rahman;K. Fukui and Y. Mukai
通讯作者：
K. Fukui and Y. Mukai

Bioactive beads-mediated transformation of rice with large DNA fragments containing Aegilops tauschii genes

生物活性珠介导的含有节节山羊草基因的大DNA片段转化水稻