プログラム細胞死細胞を原料とした新しい人工細胞外小胞の開発

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プログラム細胞死を誘導した細胞を用いた人工細胞外小胞の調製と物性解析を進めている。調製条件の検討のために、安定して培養が可能ながん細胞（HeLa細胞）および樹立細胞である線維芽細胞（NIH3T3細胞)を用いた。プログラム細胞死様式として、高静水圧誘導細胞死を選択し、圧力条件を変更してin vitroにて各様式の細胞死を誘導した。得られたプログラム細胞死誘導細胞を回収し、残存しているDNAを分解するために核酸分解酵素（DNase）処理を行った。その後、エクスルーダーにて細胞を破壊することによって物理的に小胞を形成させ細胞外小胞を得た。上記の手法によって、細胞外小胞を得ることができた。細胞外小胞のサイズを動的光散乱（DLS）を用いて解析した。得られた細胞外小胞のサイズ分布はかなり広かった。これは細胞の種類に依存しなかった。高静水圧処理では細胞膜の圧縮が生じることが報告されており、その部分は破壊するのが困難になる。このことがエクストルーダーの膜孔を通過する際にばらつきを生じさせていることが考えられた。しかし、圧力を下げると確実な細胞膜破壊が困難になるため、圧力を下げずにエクストルーダーの条件検討を行い、サイズコントロールを試みた。エクストルーダーの取り扱い方など検討が必要な条件項目が多く、安定した細胞外小胞を得るために時間を要しており、現在も検討中であるが、一定の分布の細胞外小胞を得られる条件範囲の目処がつき、再現性の確認を行っている。再現性を得るための要点として、圧力処理した細胞の回収方法（取扱法）およびエクストルーダーの膜孔を通過させる回数の影響が大きいことがわかった。