ATOH8遺伝子の糸球体上皮細胞における機能と発現制御機序の解明

阐明肾小球上皮细胞ATOH8基因的功能和表达调控机制

• 批准号: 22K08303
• 负责人: 浜谷 博子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08303/
• 关键词: ATOH8; 糸球体上皮細胞; アドリアマイシン腎症; ポドサイト; ＴGF-β

ATOH8遺伝子は糸球体上皮細胞(ポドサイト)に発現し、FSGSモデル動物ではその発現が低下するためポドサイトの機能維持に重要である可能性がある。本研究の目的は、ポドサイトにおけるATOH8の機能を明らかにすることである。そのために①ATOH8の発現をshRNAにより減弱させRNA-Seqによる解析、②ATOH8欠損マウスの腎組織障害の評価を行った。培養糸球体上皮細胞のATOH8の発現をshRNAにより減弱させ、RNA-Seqを行い発現が変化する遺伝子を解析した。ATOH8の発現減弱によりTGF-βシグナリングが活性化し、上皮系の遺伝子の発現低下と間葉系の遺伝子の発現上昇を示し、上皮間葉転換(EMT)が生じていることが示唆された。同様の結果をmRNAの発現をリアルタイムPCR、蛋白の発現をウェスタンブロッティングで確認した。また、Atoh8欠損マウスの腎組織障害の有無の評価を行った。Atoh8欠損マウスは10週齢において尿蛋白を認めず、腎組織もコントロールと比べ明らかな変化を認めなかった。そのため、アドリアマイシンの尾静注によるFSGSモデルを作製し、ポドサイト障害を誘発した際により腎症が重症化するか検討した。Atoh8欠損マウス、コントロールマウスとも10週齢で片腎摘を行い、その2週間後にアドリアマイシンを尾静注したところどちらも高度蛋白尿を生じたが、有意差は認めなかった。腎組織のPAS染色にてコントロールマウスと比べAtoh8欠損マウスでは糸球体硬化をより多く認めた。今後はさらに免疫染色にて腎組織障害の評価を行う予定である。

ATOH8 gene may be important for the development of FSGS in human spherical epithelial cells and for the maintenance of FSGS function. The purpose of this study is to clarify the function of ATOH8. The expression of ATOH8 was detected by shRNA, and the damage of ATOH8 was evaluated by RNA-Seq. Expression of ATOH8 in cultured human epithelial cells was reduced by shRNA and analyzed by RNA-Seq. ATOH8 expression decreased due to TGF-β protein activation, decreased epithelial and mesenchymal protein expression, and increased epithelial mesenchymal transition (EMT). The same results were found in mRNA expression, protein expression, and gene sequencing. A review of kidney tissue damage caused by Atoh8 Atoh8 is a 10-week period for urine protein, kidney tissue, and urine protein. FSGS is the most effective way to control, control, and control kidney disease. Atoh8: Loss of weight, loss of weight PAS staining of kidney tissue is more effective than Atoh8. In the future, the evaluation of renal tissue damage by immunostaining will be determined.