糸球体上皮細胞におけるRho-GTPase制御機構を解明する

阐明肾小球上皮细胞中 Rho-GTPase 调节机制

基本信息

  • 批准号:
    21K16164
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 3万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
  • 财政年份:
    2021
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2021-04-01 至 2024-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

Rho GTPaseは細胞内アクチン線維の分解・再構築を制御し、細胞形態に重要な役割を果たしている。Rho GTPaseはGuanine nucleotide Exchange Factors (GEF)によって活性化され、GTPase-Activating Proteins (GAP)によって不活化される。これまでの研究から、糸球体上皮細胞の代表的なRho GTPaseの1つであるRac1の活性異常が尿蛋白や糸球体硬化に関わることが示されているが、その制御機構は明らかでない。本研究では近位依存性ビオチン標識法を用いて、糸球体上皮細胞におけるRac1のGEFおよびGAPの同定を試みた。GEFと高親和性を持つRac1の変異体、GAPおよびエフェクター蛋白と高親和性を持つRac1の変異体を各々ベクターに組み込み、これらを培養糸球体上皮細胞にトランスフェクションした。Rac1変異体と相互作用する蛋白をビオチンリガーゼによりビオチン化した後、ストレプトアビジンによって回収し、質量分析に供した。その結果、GEFではARHGEF7やFGD6が、GAPではARHGAP31やARHGAP10などが検出され、ポドサイトのRac1活性は主にこれらのGEFとGAPによって制御されていることが示唆された。
Rho GTPase は intracellular ア ク チ ン line d の decomposition, then construct を suppression し important な "を cut fruit, cell morphology に た し て い る. Rho GTPase Guanine nucleotide Exchange Factors (GEF)によって activated され, gtpase-activating Proteins (GAP)によって inactivated される. こ れ ま で の research か ら, si sphere epithelial cells の representative な Rho GTPase の 1 つ で あ る Rac1 の active abnormal が urine protein や si sphere hardening に masato わ る こ と が shown さ れ て い る が, そ の system of the royal institution は Ming ら か で な い. This study で は nearly a dependency ビ オ チ ン を identification method using い て, si sphere epithelial cells に お け る Rac1 の GEF お よ び GAP の with fixed を try み た. GEF と high-affinity を hold つ Rac1 の - variants, GAP お よ び エ フ ェ ク タ ー protein と high-affinity を hold つ Rac1 の - variant を each 々 ベ ク タ ー に group み 込 み, こ れ ら を training si sphere epithelial cells に ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン し た. Rac1 - variant と interaction す る protein を ビ オ チ ン リ ガ ー ゼ に よ り ビ オ チ ン change し た, ス ト レ プ ト ア ビ ジ ン に よ っ て back 収 し に, quality analysis for し た. そ の results, GEF で は ARHGEF7 や FGD6 が, GAP で は ARHGAP31 や ARHGAP10 な ど が 検 out さ れ, ポ ド サ イ ト の Rac1 activity は main に こ れ ら の GEF と GAP に よ っ て suppression さ れ て い る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

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  • 资助金额:
    $ 3万
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